Konstruksi dan Ekspresi Gen Penyandi Merozoite Surface Protein-1 Plasmodium yoelii pada Vektor Ekspresi pET32a.

Abstract

Merozoite surface protein-1 (MSP-1) merupakan protein yang terdapat dalam fase aseksual semua spesies Plasmodium dan berperan dalam invasi eritrosit oleh parasit malaria. Protein ini berpotensi sebagai kandidat vaksin malaria, dan penelitian ini bertujuan mengkonstruksi gen msp1 sintetik Plasmodium yoelii ke dalam vektor ekspresi pET32a serta mengekspresi protein MSP-1 dengan induksi IPTG. Gen msp1 sintetik yang diperbanyak melalui teknik PCR diligasikan ke dalam vektor pET32a dan dipropagasi di dalam inang E. coli TOP10. Transforman positif yang telah diverifikasi dimasukan ke E. coli BL21(DE3). Analisis pola restriksi terhadap plasmid hasil konstruksi menunjukkan adanya dua pita yang masing-masing berada di ukuran ~300 bp untuk gen msp1 dan 5900 bp untuk plasmid pET32a. Hasil sequencing menunjukkan adanya gen msp1, namun urutan basa vektor bersifat asing. Ekspresi protein dengan menggunakan IPTG konsentrasi 0.1 mM, 0.3 mM, dan 0.5 mM menghasilkan protein target, yakni MSP-1 yang terfusi dengan tioredoksin, yang berukuran total sekitar 28 kDa. Uji dot blot dengan antibodi monoklonal MSP-1 juga menunjukkan hasil yang positif.