Optimasi Produksi Protein Rekombinan Human Interferon α-2a Fusi dan Non Fusi yang Diproduksi dalam Pichia pastoris.

Abstract

Protein Interferon α-2a manusia (hIFNα-2a) merupakan protein sitokin yang banyak digunakan sebagai obat hepatitis dan terapi kanker. Teknik fusi protein hIFNα-2a menghasilkan produk degradasi akibat adanya aktivitas protease, sehingga perlu dilakukan analisis faktor pertumbuhan dan produksi. Penelitian ini bertujuan mendapatkan kondisi optimum produksi meliputi perlakuan media, waktu, suhu inkubasi serta konsentrasi induksi metanol untuk menghasilkan konsentrasi protein hIFNα-2a yang lebih tinggi pada Pichia pastoris. Metode analisis hasil optimasi menggunakan western blot, kemudian dilanjutkan dengan produksi protein pada semua kondisi optimum dan dipurifikasi dengan kromatografi afinitas, dikarakterisasi dot blot, SDS-PAGE dan dilakukan pengukuran konsentrasi protein. Produksi protein hIFNα-2a fusi dan non fusi didapatkan optimal pada media BMGY-BMMY dengan penambahan inhibitor protease dan induksi metanol dengan konsentrasi 1.5% v/v pada suhu inkubasi 30 °C selama 72 jam. Konsentrasi optimal protein hIFNα-2a fusi sebesar 3.97 mg/L dan konsentrasi protein hIFNα-2a non fusi sebesar 47.64 mg/L.