Validasi metode penghitungan populasi bakteri penambat nitrogen pada pupuk hayati

Abstract

Method validation is a verification process of a method by testing objectively in the laboratory to declare that the method has fulfilled certain requirements and in accordance with the proposed aims (SNI 19-17025-2000 Clause 5.4.5.1). This research purposed to test the validity of total plate count (TPC) and most probable number (MPN) methods of nitrogen-fixing Bradryrhizobium japonicum (BJ) bacteria, Azotobacter and Azospirillum in biofertilizers. The research was done in eight stages, namely rejuvenation of culture, culture propagation, spike recovery, accuracy, precision, T-test, linearity, and confirmation test. Rejuvenation cultured of bacteria BJ, Azotobacter, and Azospirillum showed similar results with initial cultures. Based on the results, the cell number of BJ 13 and Azotobacter used as standard was i.e. 4,20x106 and 4,74x107 cells/ml in 10-5 dilution, respectively. While cell number of Azospirillum, was 120/ml in 10-1-10-3 dilution. Recovery percentage of accuracy step in accordance with the references was in the range of 48% until 291%. T-test of the accuracy and precision test showed significantly different at α = 0.1. Linearity analysis showed that the cell number of BJ 13, Azotobacter, and Azospirillum was proportional with the concentration of fertilizer tested. Confirmation test performed on colonies BJ 13, Azotobacter, and Azospirillum showed that the results in accordance with the reference used. Moreover it was concluded that TPC and MPN methods were technically valid for calculating the cell number of nitrogen-fixing bacteria in a biofertilizer.

Validasi metode ialah suatu proses pembuktian suatu metode pengujian secara objektif yang dilakukan di laboratorium untuk menyatakan bahwa metode tersebut memenuhi persyaratan tertentu dan sesuai dengan tujuan penggunaaannya (SNI 19-17025-2000 Klausul 5.4.5.1). Penelitian bertujuan melakukan pengujian keabsahan (validasi) metode angka lempeng total (ALT) dan angka paling mungkin (APM) untuk menghitung jumlah bakteri penambat nitrogen Bradryrhizobium japonicum (BJ), Azotobacter, dan Azospirillum dalam pupuk hayati. Penelitian dilakukan delapan tahapan, yaitu peremajaan biakan, perbanyakan biakan, pembuatan spike recovery, akurasi, presisi, uji T, linieritas, dan uji penegasan. Peremajaan biakan pada bakteri BJ, Azotobacter, dan Azospirillum memperlihatkan hasil yang sama dengan masing-masing biakan awalnya. Berdasarkan hasil dalam pembuatan spike recovery (SR), diketahui bahwa jumlah sel BJ 13 dan Azotobacter yang dijadikan standar berada pada pengenceran 10-5 dengan jumlah sel 4,74.107 dan 4,20.106 sel/ml. Sedangkan Azospirillum, pada pengenceran 10-1-10-3 dengan jumlah sel 120/ml. Persen perolehan pada tahap akurasi telah sesuai dengan pustaka yang digunakan pada rentang 48%-291%. Uji T pada akurasi dan presisi jumlah sel BJ, Azotobacter, dan Azospirillum memperlihatkan hasil yang berbeda nyata pada α = 0,1. Analisis linieritas menunjukkan bahwa jumlah sel BJ, Azotobacter, dan Azospirillum berbanding lurus dengan konsentrasi pupuk yang diuji. Berdasarkan uji penegasan yang dilakukan untuk menegaskan keberadaan koloni BJ, Azotobacter, dan Azospirillum menunjukkan hasil yang sesuai. Sehingga dapat disimpulkan bahwa secara teknis metode ALT dan APM absah jika digunakan untuk menghitung jumlah sel bakteri penambat nitrogen dalam pupuk hayati