Kontruksi fusi transkripsi gen kitinase asal aeromonas caviae ws7b dan ekspresinya pada tanaman kentang kultivar desiree

Abstract

Penyakit yang disebabkan oleh cendawan maupun nematode- pada tanaman kentang dapat menurunkan produksi aotara 30 -100%. Gen chi penyandi enzim kitinase yang diisolasi dati bakteri Aeromonas cavise WS7b, merupakan balderi tanah dan Pulau Bangka, Indonesia. Enzim kitinase adalah salah satu protein yang terlibat dalam mekanisme pertahanan tanaman karena dapat mendegradasi kitin. Kitin adalah komponen utama dan dinding hita cendawan patogenik dan sel nematoda. T aoaman ttdak mengandung kitin pada selnya oleh karena itu terdapat peluang untuk mengintroduksikan gen kitinase ke dalam genom tanama" untuk merakit tanaman resisten cendawan patogen dan nematoda taopa mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangan tanaman. Penelitian ini bertujuan untuk mengkonstruksi gep chi asal bakteri Aeromonas caviae WS7b ke dalam vektor binary dan mempelajan ekspresinya pada tanaman kentang kultivar Desiree dalam usaha merakit tanaman kentang yang resiste" patogen cendawan maupun nematoda. Gen chi yang disubkloning ke dalam plasmid binary besamya 2925 bp. Hasil analisis sekuen gen chi memiliki kandungan G+C sebesar 63.74% dan A+T sebesar 36.26%, dengan jumlah asam amino 864 dan perkiraan berat molekulnya 91.6 kDalton. Hasil analisis CLUSTAL W, pembandingan sekuen dengan gen chi yang berasal dan tanaman kentang, gen ini memiliki sekuen homology sekitar 23%, dan 98% dengan chiA dan A.caviae yang diisolasi di Israel. Gen ini berhasil dikonstruksi pada plasmid binary dengan memfusikannya dibawah kendali promotor 35SCaMV dan tenninator octopin. Gen chi yang dikonstruksi secara fusi transknpsi ini ada yang searah dengan promotor (pada plasmid pARS51), dan ada yang tidak searah dengan promotor (pada plasmid pARS52) yang selanjutnya akan digunakan sebagai kontrol gen.

Fungal and nematode disease are a major limiting factor in potato production areas, not only plants are killed and reduced in the field, but also cause significant production areas, not only plants are killed and reduced in the field, but also cause significant production losses (30-100%). Chitin, a β-1,4-linked polymer of N-acetylglucosamine, is a major structural component in the cell walls of Nematode and most fungi except the Oomycetes. Chitinase catalyse the hydrolysis of chitin.