Konstruksi Plasmid Rekombinan Cryib Dan Clyiac Di Ba Wah Kontrol Promotor Terinduksi Pelukaan

Abstract

protein spesifik yang dapat melawan secara efektif hama penggerek batang ordo Lepidoptera. Hama penggerek batang merupakan hama utama tanaman padi di Indonesia. Sifat ketahanan ter!ladap penggerek batang seeara alami tidak terdapat pada tanaman padi, schingga penanganan terhadap penggerck batang memerlukan bioteknologi rekayasa genetika yang akan menghasilkan padi transgenik. Penggunaan promotor terinduksi pelukaan menyebabkan ekspresi gen tidak teljadi secara terus-menerus sehingga mcmpcl'lama kcmungkinan patahnya resistensi hama yang akan mengurangi dampak terhadap lingkungan. Untuk mengintegrasikan gen clylB dan clylAc ke tanaman padi diperlukan DNA pembawa (vektm) dan media transfer. Tujuan penelitian ini adalah menyediakan dua plasmid rekombinan yang masing-m<lsing mcngandung gen clylB dan clylAc di bawah kontrol promotor terinduksi pelukaan maize profeinase inhibitor (M!'I). Adapun tahap penelitian yang dilakukan adalah isoiasi dan pemurnian DNA sisipan (cl)lIB dan c/:)J!Ac) dan DNA pembawa (pCAMBIA 1301), penyambungan (ligasi) DNA sisipan dan DNA pembawa yang dilanjutkan dengan transtbnllasi ke sel I:.:. coli. Koloni DNA rekombinan hasil scleksi birll putih dan seleksi antibiotik kemudian diisolasi dan dilakukan analisis molckuler pcmetaan DNA rckombinan dcngan pemotongan oleh enzim restriksi. Konstruksi vektor clylB eli bawah kontrol promotor terinduksi pelukaan MPl, dengan Illcnyisipkan gen clylB ke dalam plasmid pCAMBIA 1301 telah berhasil dilakukan. Untuk konslruksi veklor clyiAc di bawah kontrol promotor tel'induksi pelukaan MPI belulll berhasil dilakukan, yaitu dcngan tidak tersisipnya gen cl),IAc ke dalam pCAMBIA 1301. Konlirmasi keberhasilan dan ketidakbcrhasilan ini berdasarkan uji elektroforesis gel agarosa hasil pemotongan DNA rekombinan oleh enzim Eeo RI, Kpn I, Kpn I dengan Hind Ill, Kpn I dengan BamI-II, dan BamE I dengan I-lind Ill.