TRANSFORMASI PADI KULTIVAR HAWARA BUNAR DENGAN VEKTOR REKOMBINAN pRGEB32_ROC5-Cr1 UNTUK MENGEDIT GEN ROC5

Abstract

Padi (Oryza sativa L.) merupakan komoditas pangan penting yang produktivitasnya menurun akibat cekaman kekeringan. Penelitian ini bertujuan mengedit gen Rice Outermost Cell-specific 5 (ROC5) pada padi kultivar Hawara Bunar menggunakan sistem CRISPR/Cas9 melalui transformasi in-planta berbantuan Agrobacterium tumefaciens. Benih diinokulasi menggunakan suspensi A. tumefaciens (OD600 0,2–0,3) yang membawa konstruk sgRNA. DNA genom diisolasi menggunakan metode Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide (CTAB) maupun kit ekstraksi DNA. Keberhasilan transformasi diverifikasi menggunakan primer Hygromycin Phosphotransferase (HPT), sedangkan keberhasilan penyuntingan gen ROC5 dianalisis menggunakan primer ROC5 melalui PCR dan sekuensing. Efisiensi transformasi yang diperoleh mencapai 52,63%. Analisis sekuensing menunjukkan tidak ditemukannya mutasi pada daerah target gen ROC5. Hasil penelitian menunjukkan bahwa transformasi padi kultivar Hawara Bunar menggunakan sistem CRISPR/Cas9 melalui metode in-planta berhasil, namun hasil penyuntingan gen ROC5 belum terdeteksi berdasarkan hasil analisis sekuensing.