REKONSTRUKSI PLASMID pPICZaB-GOX-Xho MELALUI MUTASI TERARAH Q516H DAN V23I

Abstract

Glukosa oksidase (GOX) merupakan enzim golongan oksidoreduktase yang banyak dimanfaatkan dalam bidang bioteknologi karena kemampuannya mengkatalisis oksidasi ß-D-glukosa menjadi D-glukono-d-lakton dan hidrogen peroksida (H2O2). Penelitian terdahulu menunjukkan bahwa konstruksi plasmid pPICZaB-GOX-Xho mengandung beberapa mutasi acak, di antaranya substitusi histidin menjadi glutamin pada residu 516 (Q516H) dan isoleusin menjadi valin pada residu 23 (V23I), yang berpotensi memengaruhi konformasi enzim. Penelitian ini bertujuan merekonstruksi kedua mutasi tersebut melalui mutasi titik (point mutation) menggunakan metode site-directed mutagenesis. Hasil penelitian menunjukkan bahwa primer mutagenesis Q516H dan V23I memenuhi kriteria desain serta konstruksi plasmid berhasil diamplifikasi menggunakan metode whole plasmid PCR. Plasmid pPICZaB-GOX-Xho-Q516H berhasil ditransformasikan ke dalam Escherichia coli DH5a dan diisolasi dengan kualitas DNA yang baik.

Glucose oxidase (GOX) is an oxidoreductase enzyme widely used in biotechnology due to its ability to catalyze the oxidation of ß-D-glucose into D-glucono-d-lactone and hydrogen peroxide (H2O2). Previous studies showed that the pPICZaB-GOX-Xho plasmid construct contained several random mutations, including the substitution of histidine with glutamine at residue 516 (Q516H) and isoleucine with valine at residue 23 (V23I), which may affect the enzyme conformation. This study aimed to reconstruct these two mutations through point mutagenesis using the site-directed mutagenesis method. The results showed that the Q516H and V23I mutagenic primers met the design criteria, and the plasmid constructs were successfully amplified using the whole-plasmid PCR method. The pPICZaB-GOX-Xho-Q516H plasmid was successfully transformed into Escherichia coli DH5a and subsequently isolated with good DNA quality.