Ligasi Konstruk Gen Glukosa Oksidase dengan Vektor Ekspresi Pichia pastoris pPICZa dan Transformasi Escherichia coli DH5a

Abstract

Glukosa oksidase (GOx, EC 1.1.3.4) adalah sebuah enzim serbaguna dengan potensi aplikasi di banyak industri. Sebuah konstruk sebesar 1787bp gen penyandi enzim ini telah dihasilkan dari isolat lokal Aspergillus niger IPBCC 08.610 dari penelitian pendahulu. Konstruk ini didesain supaya dapat disisipkan ke dalam plasmid pPICZa untuk memanfaatkan sistem ekspresi Pichia pastoris yang telah dioptimasi untuk mengekspresikan protein heterolog. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan ligasi terhadap konstruk gen glukosa oksidase tersebut dengan vektor ekspresi P. pastoris pPICZa (3593 bp) sampai memperoleh plasmid rekombinan yang dapat digunakan untuk transformasi sel kompeten Escherichia coli DH5a. Pola pita elektroforesis gel sampel reaksi restriksi-ganda XhoI-XbaI mengindikasikan aktivitas sub-optimal enzim XbaI. Kondisi tersebut menjadi penyebab utama tidak dihasilkan koloni transforman Escherichia coli DH5a. Masalah-masalah penyerta lain seperti kesalahan penaksiran kuantitas DNA campuran reaksi ligasi dan efisiensi transformasi yang tidak diketahui juga dikaji.

Glucose oxidase (GOx, EC 1.1.3.4) is a versatile enzyme with potential applications in many industries. A 1787bp construct of the gene encoding this enzyme had been generated from a local isolate of Aspergillus niger IPBCC 08.610 in a previous study. This construct was designed to be inserted into the pPICZa plasmid to utilize the Pichia pastoris expression system, which has been optimized for expressing heterologous protein. This study aimed to ligate the glucose oxidase gene construct with the P. pastoris pPICZa (3593bp) expression vector to obtain a recombinant plasmid capable of transforming competent Escherichia coli DH5a cells. The electrophoresis gel band patterns of the XhoI-XbaI double-digestion reaction indicated sub-optimal activity of the XbaI enzyme. This condition was the primary reason for the absence of E. coli DH5a transformant colonies. Other contributing factors, such as errors in estimating the quantity of DNA in the ligation reaction mix and unknown transformation efficiency were also examined.