Konstruksi Vektor Fusi Gen Penyandi Peptida Sinyal Usp45 dengan Gen Plantarisin F dari Lactobacillus plantarum

Abstract

Plantarisin F merupakan bakteriosin yang disandikan lokus plnF pada Lactobacillus plantarum yang bersifat antimikrob. Ekspresi plantarisin F pada inang ekspresi lain memerlukan peptida sinyal untuk mengarahkan sekresinya. Peptida sinyal Usp45 (spusp45) dari Lactococcus lactis adalah peptida sinyal utama yang digunakan oleh L. lactis untuk mensekresikan protein. Penelitian ini bertujuan melakukan fusi sekuen gen spusp45 dengan gen plnF, serta kloning pada vektor ekspresi pNZ8148. Sekuen spusp45 dan plnF diamplifikasi dengan teknik PCR (Polymerase Chain Reaction). Teknik PCR Overlap Extension digunakan untuk membuat gen fusi spusp45:plnF. Gen fusi spusp45:plnF yang berukuran 207 pb disisipkan ke dalam vektor pGEM-T easy menghasilkan vektor pGEM:spusp45:plnF sedangkan vektor pNZ8148:spusp45:plnF dihasilkan dari pNZ8148. pGEM:spusp45:plnF diintroduksikan ke dalam Escherichia coli TOP10 sementara pNZ8148:spusp45:plnF diintroduksikan ke dalam inang Escherichia coli MC1061. Konfirmasi sekuen dengan peruntunan didapatkan adanya penambahan satu kodon penyandi alanina pada posisi kodon ke-30.