Ekspresi Enzim Rekombinan MMLV-Reverse Transcriptase di Sistem Ekspresi Escherichia coli BL21 Menggunakan Metode Autoinduksi
View/ Open
Date
2024Author
Handayani, Christina Vivid
Mubarik, Nisa Rachmania
Andriani, Ade
Metadata
Show full item recordAbstract
Moloney Murine Leukemia Virus (MMLV) memiliki enzim transkripsi balik atau reverse transcriptase yang dapat mengubah RNA menjadi cDNA. Selama pandemi Covid-19, terjadi peningkatan permintaan reverse transkriptase yang merupakan komponen penting dari alat pendeteksi virus corona. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan mempelajari ekspresi enzim rekombinan Moloney Murine Leukemia Virus-Reverse Transcriptase (MMLV-RT) serta mendapatkan waktu dan media inkubasi optimum menggunakan metode autoinduksi.
Protein rekombinan MMLV-RT diproduksi di sistem ekspresi Escherichia coli yang telah disisipi plasmid pembawa gen MMLV-RT. Plasmid pD451-SR diregulasi dengan promotor T7 untuk mengekspresikan MMLV-RT. Beberapa penelitian terdahulu menggunakan isopropyl -D-thiogalactopyranoside (IPTG), namun dalam penelitian ini menggunakan laktosa yang memiliki harga lebih murah dibandingkan IPTG sehingga dapat mengurangi biaya produksi.
Sel inang E. coli BL21 ditransformasi dan dikulturkan dalam empat media autonduksi, yaitu media Luria Bertani, 2XYT, Imperial College, dan Terrific Broth. Protein rekombinan MMLV-RT diekspresikan paling optimum di media Imperial College dengan waktu inkubasi 96 jam. Protein MMLV-RT memiliki kelarutan yang baik berdasarkan uji solubilitas dan sebagian besar protein MMLV-RT terlarut pada fraksi supernatan hasil ekstraksi. Protein rekombinan MMLV-RT dipurifikasi menggunakan Immobilized Metal Affinity Chromatography (IMAC) dan mendapatkan konsentrasi sebesar 10,117 mg/mL. Aktivitas enzim MMLV-RT yang diproduksi dalam studi ini diuji dan menunjukkan aktivitas spesifik sebesar 629,4 U/mg.