Konstruksi plasmid rekombinan untuk menghasilkan padi tahan hama penggerek batang (stem borer)

Abstract

Hama penggerek batang merupakan hama utama padi di Indonesia. Salah satu usaha untuk mengatasi penggerek batang adalah perbaikan genetika tanaman padi. CryLA(b) adalah gen yang diisolasi dari Bacillus thuringiensis yang menyandikan protein spesifik dan dapat melawan secara efektif serangga lepidoptera termasuk penggerek batang. Gen cryIA(b) ini dapat ditransfer ke gen tanaman padi. Untuk transfer ini diperlukan DNA pembawa (vektor) dan media transfer. Tujuan penelitian ini adalah ntuk mentisipkan gen cryIA (b) ke dalam plasmid pCambia 1301 sehingga menghasilkan DNA rekombinan serta mentransformasi DNA rekombinan tersebut ke Agrobacterium tumefaciens LBA 1119 dengan teknik tri-parental mating. Gen cryIA(b) diisolasi dari plasmid pGem-4 dengan menggunakan enzim restriksi Hind III. Pemisahan gen crylA(b) dari media gel agarosa dilakukan dengan menggunakan Sephaglas Brand Prep Kit. Plasmid pCambia 1301 dipotong dengan enzim restriksi Hind III. Pencegahan resirkularisasi plasmid pCambia 1301 dilakukan dengan menghidrolisis gugus fosfat pada ujung 5' memakai enzim calf intestinal alkaline phosphatase (CIAP). Perlakuan perbandingan gen crylA (b) dan plasmid pCambia 1301 adalah 1:1, 3:1, dan 6:1. Seleksi bakteri yang mengandung DNA rekombinan dan telah mengalami transformasi adalah kombinasi antibiotik dan seleksi biru/putih (screening blue/white). Gen cryLA(b) berhasil disisipkan ke dalam plasmid pCambia 1301. DNA rekombinan yang terkonstruksi sudah dapat dipetakan. Pemetaan DNA rekombinan dilakukan dengan memotong DNA rekombinan dengan enzim restriksi Eco RI. Namun demikian transformasi DNA rekombinan ke dalam Agrobacterium tumefaciens LBA 1119 dengan tri-parental mating belum berhasil dilakukan. Penyebab belum berhasilnya transformasi ini memerlukan penelitian lebih lanjut.