Isolasi bacillus spp. penghasil a-Amilase ekstraseluler dan penentuan suhu serta pH optimum pertumbuhan

Abstract

Permintaan terhadap a-amilase termostabil makin meningkat terutama untuk industri tekstil, kertas maupun pangan. Salah satu penghasil a-amilase termostabil ialah bakteri termofil yang dapat diisolasi dari sumber air panas maupun kompos. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi bakteri termofil penghasil a-amilase ekstraseluler dan menentukan suhu maupun pH optimum pertumbuhan dari isolat yang terpilih. Sejumlah 20 isolat bakteri ditemukan dari kompos dan dua sumber air panas. Tiga isolat dengan aktivitas amilase tertinggi (lebih dari 1 U/ml) yaitu Bacillus sp. CW-1, Bacillus sp. CW-3, dan Bacillus sp SW-2. Ketiga isolat ini ditumbuhkan pada media produksi yang mengandung ekstrak khamir 0.5%, bacto pepton 0.5%, pati kentang 1%, dan CaCl₂2 0.1% (khusus untuk Bacillus sp. SW-2). Suhu pertumbuhan optimum Bacillus sp. CW-1 dan Bacillus sp. CW-3 45°C, dan Bacillus sp. SW-2 pada 60°C. Sedangkan pH optimum pertumbuhan untuk ketiga isolat sama, yaitu 7.5. Aktivitas a-amilase diukur dengan metode Bernfeld (1955) dan uji kadar protein dilakukan dengan metode Bradford (1976). Aktivitas a-amilase tertinggi terdeteksi pada isolat Bacillus sp. SW-2 (4.88 U/ml) setelah 39 jam masa inkubasi, dengan kadar protein 0.25 mg/ml dan aktivitas spesifik 19.16 U/mg. Aktivitas tertinggi kedua dihasilkan oleh Bacillus sp. CW-1 (3.49 U/ml) setelah 48 jam masa inkubasi, dengan kadar protein 0.35 mg/ml dan aktivitas spesifik 9.8 U/mg. Sedangkan aktivitas terendah dihasilkan oleh Bacillus sp. CW-3 (1.75 U/ml) tercapai setelah 33 jam masa inkubasi, dengan kadar protein 0.42 mg/ml dan aktivitas spesifik 4.16 U/mg. Peningkatan aktivitas amilase terjadi pada Bacillus sp. SW-2 dengan penambahan CaCl₂ pada media tumbuhnya.