Isolasi, Identifikasi dan Karakterisasi Gen Virulen Streptococcus agalactiae sebagai Kandidat Vaksin DNA
View/ Open
Date
2014Author
Sutanti
Soejoedono, Retno Damayanti
Faizal, Irvan
Metadata
Show full item recordAbstract
Salah satu masalah utama dalam budidaya ikan nila (Oreochromis niloticus) di
Indonesia adalah penyakit akibat bakteri Streptococcus agalactiae. Vaksinasi
merupakan cara yang paling efektif untuk mencegah dan melindungi penyakit tersebut.
Vaksin DNA merupakan teknologi vaksin generasi ketiga berdasarkan antigen yang
digunakan. Gen mga adalah DNA-binding protein yang mengaktivasi beberapa gen
virulen untuk mengkode protein M, C5a peptidase dan protein Mga. Penelitian ini
bertujuan untuk isolasi, identifikasi dan karakterisasi gen mga untuk mendukung
pengembangan vaksin DNA.
Isolat berbentuk coccus, Gram positif berhasil diisolasi dan diekstraksi dari ikan
nila sakit. Berdasarkan gen penyandi 16S rRNA teridentifikasi sebagai bakteri S.
agalactiae dengan kesamaan 97% (no. Aksesi GenBank EU075070.1). Gen mga S.
agalactiae berhasil diisolasi dengan ukuran 1454 bp. Kloning gen ke vektor pGEM-T
easy dan transformasi menggunakan sel kompeten Eschericia coli DH5α dengan
metode heat shock berhasil dilakukan dan hasil sekuensing gen tersebut sesuai dengan
sekuen gen target. Vektor pGEM-T easy dengan sisipan gen mga berhasil direstriksi
menggunakan metode double digestion enzim Sal I dan Not I.
Fragmen DNA telah berhasil dikloning ke vektor pMBA yang memiliki promoter
β-actin ikan medaka sebagai pMBA-MGA. Analisis sekuen nukleotida berdasarkan
primer M13 menunjukkan bahwa klon mengandung gen mga dengan 98% kesamaan
terhadap M protein mga S. agalactiae (no. Aksesi GenBank CP003919.1). Peta plasmid
telah berhasil digambar menggunakan program Snapgene 1.1.3. Konstruksi gen mga
yang dikendalikan oleh promoter β-actin ikan medaka telah berhasil dibuat dan ini
merupakan kandidat vaksin DNA untuk mengendalikan infeksi S. agalactiae pada ikan
nila