Isolasi, Identifikasi dan Karakterisasi Molekular Virus Hepatitis B pada Owa Jawa (Hylobates moloch) di Indonesia

Abstract

Virus hepatitis B (HBV) dilaporkan tidak hanya dapat menginfeksi manusia, tetapi juga primata non-manusia, terutama kelompok kera besar seperti orangutan, gorila, simpanse, serta kera kecil dari famili Hylobatidae. Di antara spesies lain dalam genus, Hylobates moloch (owa jawa atau keperakan/owa jawa), yang dianggap sebagai salah satu spesies endemik Indonesia yang terancam punah, dilaporkan memiliki HBV dari strain mereka sendiri. Analisis HBV yang diisolasi dari owa yang terinfeksi dilakukan dalam penelitian ini untuk mengungkap keterkaitannya dengan data yang dipublikasikan. Sampel plasma dari sembilan owa jawa diperoleh sebagai bagian dari tujuan diagnostik. Hewan-hewan tersebut sebelumnya dinyatakan positif adanya hepatisis B-surface antigen (HBsAg) dengan enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Sampel DNA diekstraksi dari sembilan sampel plasma tersebut untuk digunakan sebagai template untuk amplifikasi daerah Pre-S1 dengan teknik polymerase chain reaction (PCR) menggunakan primer semi degenerate yang dapat mengamplifikasi beberapa strain HBV. Produk PCR dari 457 - 459 pasangan basa kemudian dilakukan analisis polimorfisme panjang fragmen restriksi (RFLP) menggunakan enzim Bst2UI untuk mengevaluasi pola fragmen yang dibelah. Produk PCR diurutkan untuk analisis homologi lebih lanjut dan untuk membuat pohon filogenetik dari data sekuensing yang diperoleh dari penelitian dibandingkan dengan data yang dipublikasikan. Dua sampel plasma digunakan sebagai templat untuk amplifikasi seluruh wilayah menggunakan set 4 primer. Produk PCR dari 3192 pasangan basa diurutkan untuk analisis homologi lebih lanjut dan untuk membuat pohon filogenetik. Analisis pohon filogenetik untuk wilayah nukleotida Pra-S1 dan seluruh wilayah menunjukkan bahwa isolat owa jawa membentuk kelompok mereka sendiri, terpisah dari isolat primata bukan manusia lainnya.