| dc.description.abstract | Ikan gurami Osphronemus goramy merupakan komoditas nasional budidaya air tawar yang tersebar di Jawa, Sumatera dan Kalimantan. Produksi budidaya ikan gurami memiliki permasalahan ketergantungan pada pemijahan alami yang mengandalkan sinyal lingkungan dan lambatnya maturasi pertama. Intervensi teknologi rekayasa reproduksi pada ikan gurami dapat dilakukan dengan menggunakan protein rekombinan follicle-stimulating hormone (FSH) dan luteinizing hormone (LH). Secara umum FSH dan LH terdiri dari subunit yang bersifat umum, dan subunit ꞵ bersifat spesifik mencirikan spesies tertentu, kedua subunit tersebut berasal dari sekuen gen yang berbeda. Informasi sekuen dan ekspresi FSH dan LH subunit-β (OgFSHβ dan OgLHβ) pada ikan gurami penting diketahui untuk membuat protein rekombinan FSH dan LH. Namun, saat ini belum ada laporan mengenai sekuens gen dan analisis ekspresi OgFSHβ dan OgLHβ. Selain informasi sekuens gen, informasi terkait ekspresi gen OgFSHβ dan OgLHβ dalam kaitannya dengan perkembangan gonad ikan gurami, penting untuk diketahui dan dievaluasi. Respons molekuler ekspresi OgFSHβ dan OgLHβ pascainduksi hormon dapat digunakan untuk mengevaluasi efektivitas induksi hormon dalam merangsang pemijahan. Sehingga tujuan dari penelitian ini untuk mengidentifikasi sekuen OgFSHβ dan OgLHβ serta menganalisis ekspresi kedua gen tersebut pada berbagai ukuran bobot ikan gurami serta keterkaitannya dengan perkembangan gonad ikan gurami.
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Agustus 2019 hingga Januari 2020 di Laboratorium Reproduksi dan Genetika Organisme Akuatik, Departemen BDP, FPIK, IPB. Identifikasi gen dilakukan dengan metode polymerase chain reaction (PCR), dilanjutkan dengan kloning gen dan sekuensing. Identifikasi dilakukan secara bertahap diawali dengan identifikasi awal sekuen OgFSHꞵ dan OgLHꞵ. Selanjutnya, dilakukan identifikasi pada bagian 3’-UTR dan 5’-UTR. Pembacaan sekuen hasil identifikasi awal, 3’-UTR dan 5’UTR dirangkai menjadi satu untuk mendapatkan sekuen OgFSHβ dan OgLHβ secara utuh. Tahap penelitian selanjutnya dilakukan pengamatan perkembangan gonad pada calon induk ikan gurami betina dengan bobot tubuh 750 g, 1000 g, dan 1500 g. Parameter uji yang dievaluasi pada tahap ini adalah nilai gonadosomatic index (GSI), hepatosomatic index (HSI) dan pengamatan histologi gonad, serta analisis ekspresi gen OgFSHβ dan OgLHβ pada setiap ukuran bobot tubuh. Analisis ekspresi gen OgFSHꞵ dan OgLHꞵ juga dilakukan untuk mengevaluasi respon molekuler pasca induksi hormon menggunakan LHRH-a dengan dosis 0.75 mL kg-1 bobot tubuh dan 0.75 ml kg-1 larutan fisiologis NaCl 0.9% sebagai kontrol, melalui penyuntikan secara intramuskular. Analisis ekspresi gen OgFSHꞵ dan OgLHꞵ dilakukan dengan mengukur ekspresi messenger ribonucleic acid (mRNA) menggunakan metode real-time quantitative PCR (qPCR).
iii
Penelitian ini telah berhasil mengidentifikasi urutan lengkap gen OgFSHꞵ dan OgLHꞵ yang masing-masing memiliki 126 dan 142 residu asam amino. Berdasarkan sekuens asam amino yang ditranslasikan dari kedua sekuens tersebut, OgFSHβ memiliki similaritas paling tinggi dengan kelompok ikan Anabantoid (85-94,17%) diikuti oleh Synbranchiformes (71,15%), dan Pleuronectoformes (70,87%). Pada gen OgLHβ diketahui memiliki similaritas paling tinggi pada kelompok ikan Anabantoid (84-85,8%), diikuti oleh Cypriniformes (76,92%), dan ikan Beloniformes (75,76%). Struktur protein OgFSHꞵ memiliki kemiripan dengan struktur FSHꞵ organisme lain, sedangkan struktur protein OgLHꞵ memiliki kemiripan dengan bentuk struktur LHβ Trichogaster tricopterus yang juga merupakan kelompok taksa Anabantoidei yang sama dengan ikan gurami. Tingkat ekspresi mRNA OgFSHβ pada tahap mid-vitelogenesis (kelompok bobot 1000 g) meningkat 3.2 kali dari tahap previtelogenesis (kelompok bobot 750 g). Tingkat ekspresi mRNA OgFSHβ pada tahap maturasi (kelompok bobot 1500 g) meningkat sebesar 330 kali. Sementara itu, level ekspresi mRNA OgLHβ pada tahap previtelogenesis dan mid-vitelogenesis tidak berbeda nyata, dan peningkatan ekspresi mRNA sebesar 40 kali terjadi pada tahap maturasi. Pada pengujian respon induksi hormon, tingkat ekspresi mRNA OgFSHβ pada ikan 1000 g dan 1500 g meningkat 3-4 kali lipat dibandingkan dengan kontrol dalam 24 jam pasca induksi. Namun, level ekspresi mRNA OgFSHβ antara kelompok bobot 1000 g dan 1500 g tidak menunjukkan perbedaan. Namun tingkat ekspresi mRNA OgLHβ yang tidak terjadi perbedaan signifikan peningkatan ekspresinya dengan kontrol. Tingkat ekspresi mRNA OgFSHβ pada ikan 1000 g dan 1500 g meningkat 3-4 kali lipat dibandingkan dengan kontrol dalam 24 jam pasca induksi. Namun, level ekspresi mRNA OgFSHβ antara kelompok bobot 1000 g dan 1500 g tidak menunjukkan perbedaan. Hal berbeda terjadi pada ekspresi mRNA OgLHβ yang tidak terjadi perbedaan signifikan peningkatan ekspresinya dengan kontrol.
Berdasarkan hasil penelitian, dapat disimpulkan bahwa telah berhasil mengidentifikasi urutan lengkap gen OgFSHꞵ dan OgLHꞵ dengan 126 dan 142 residu asam amino. Ekspresi mRNA OgFSHꞵ meningkat selama pengembangan gonad awal dan terus meningkat pada tahap maturasi, sementara tingkat mRNA OgLHꞵ hanya meningkat pada tahap maturasi ikan gurami. Saran yang dapat disampaikan adalah perlu untuk engkarakterisasi sekuen promoter dan reseptor OgFSHβ dan OgLHβ sehingga upaya untuk membuat protein rekombinan dalam merekayasa kematangan gonad dan pemijahan ikan gurami menjadi lebih komprehensif. | id |
