| dc.description.abstract | Gap junctions (GJ) merupakan salah satu penghubung diskus interkalatus
yang tersusun dari kardiomiosit. Peranan GJ yang tersusun dari koneksin sebagai
transportasi ion dan molekul kecil. Kelainan morfologi GJ menyebabkan blok
hantaran sel listrik jantung (BHLJ). Penanganan BHLJ saat ini menggunakan pacu
jantung tetap kamar tunggal ataupun ganda mahal dan masih menyebabkan
peningkatan komplikasi. Eksplorasi pengobatan terapi sel punca mesenkimal
sumsum tulang (SPMST) masih diperlukan dengan menggunakan model sumber
sel dari Macaca nemestrina (M. nemestrina) yang menjadi salah satu alternatif
terapi BHLJ dan kelak diujikan secara in vivo.
Penelitian ini bertujuan melakukan identifikasi dan diferensiasi kardiomiosit
serta sel listrik jantung koneksin asal isolasi pengembangan SPMST M. nemestrina
secara in vitro. Isolasi dan pengembangan SPMST dengan mengambil aspirat cairan
sumsum tulang proksimal tulang humerus dari 4 ekor M. nemestrina jantan dewasa
disimpan dalam tabung heparin. Pemisahan sel menggunakan larutan Ficoll–
Hypaque untuk mendapatkan SPMST dengan cara sentrifugasi pada kecepatan
800xg dan dicuci dengan phosphat buffer saline 20% sebanyak dua kali.
Penghitungan sel untuk sebagian kecil sel berinti tunggal (SBT) dihitung setelah
diwarnai tripan biru dan sebagian besar SBT lainnya dikultur pada pelat biakan
enam sumur dalam media penumbuh fetal bovine serum selanjutnya diinkubasi
pada kondisi suhu 37 oC dan CO2 5%. Setelah sel mencapai konfluensi 70 - 80%
dilakukan pasase setiap tujuh hari dan penggantian media setiap dua kali seminggu
sampai tiga minggu. Bila sel tidak tumbuh, maka dikeluarkan dari peneltian.
Ke empat sumber sel M. nemestrina terlihat sehat dari viabilitasnya lebih dari
90%, tetapi sel Mn#3 mati setelah hari ke tujuh, sehingga dikeluarkan dari
penelitian ini. Tiga sumber sel Mn#1, Mn#2, dan Mn#4 dilanjutkan ke pasase
berikutnya. Waktu populasi ganda (WPG) memanjang sesuai pasasenya dan tetap
mengikuti 4 tahapan, yaitu reseeding, lag, log, dan stationary. Telah berhasil
diisolasi dan dikembangkan SPMST M. nemestrina dengan bukti adanya ekspresi
marka gen CD73/ Nt5e (101 bp) dan CD105/ Eng (104 bp), tidak ada ekspresi
marka gen Cd34 (380 bp) dan CD45/ Ptrpc (167 bp), adanya ekspresi marka gen
cTn I/ Tnni3, a actinin/ Actn2, Gata4, Nkx-2.5/ Nkx2-5, Cx40/ Gja5, Cx43/ Gja1,
serta gen kontrol Gapdh (352 bp). Diferensiasi dapat dibuktikan pada osteosit,
kondrosit, adiposit, kardiomiosit serta Cx43 dan Cx40.
Sebagai kesimpulan, telah berhasil dibuktikan diferensiasi dan identifikasi
kardiomiosit serta sel listrik jantung koneksin asal isolasi dan pengembangan
SPMST M. nemestrina secara in vitro Marka transkripsi gen dan translasi
proteinnya telah dapat dibuktikan juga. | id |
