| dc.description.abstract | Kanker payudara adalah jenis kanker yang paling umum diderita oleh wanita di seluruh dunia dan merupakan salah satu penyebab kematian utama akibat kanker pada wanita di seluruh dunia, termasuk di Indonesia. Mutasi pada gen PIK3CA sering ditemukan dalam kasus-kasus penyakit kanker payudara. PIK3CA adalah gen pengode subunit katalitik p110-α pada protein PI3K yang memiliki banyak peranan penting dalam aktivitas selular. Terdapat tiga hostpots pada gen PIK3CA, salah satunya adalah mutasi PIK3CA H1047R yang memiliki frekuensi lebih tinggi dibanding jenis mutasi lainnya. Deteksi pada titik ini dapat diaplikasikan sebagai faktor prognosis dan prediktif untuk terapi trastuzumab.
Deteksi mutasi menggunakan teknik qPCR merupakan salah satu teknik yang banyak digunakan karena pelaksanaannya yang relatif sederhana dan hasilnya yang kuat. Pengadaan kontrol positif untuk deteksi PIK3CA wild-type dan H1047R berbasis Tm Shift qPCR akan mendukung analisis data secara efisien dan mencegah munculnya hasil negatif semu.
Pada penelitian ini, plasmid rekombinan berstruktur tandem (dinamakan pGEM-tandPIK3CA) dikonstruksi untuk menjadi positif kontrol pada sistem deteksi PIK3CA H1047R berbasis Tm shift qPCR. Plasmid rekombinan pGEM-tandPIK3CA dikonstruksi dengan cara meligasi fragmen PIK3CA wild-type dan PIK3CA H1047R secara tandem ke dalam plasmid vektor pGEM®-T Easy. Keberhasilan pengonstruksian plasmid tandem dikonfirmasi dengan restriksi BamHI, pengurutan DNA dan qPCR. Analisis statistik dilakukan untuk mengetahui reprodusibilitas dan repeatabilitas plasmid.
Hasil yang diperoleh menunjukkan pGEM-tandPIK3CA berhasil dikonstruksi dan keberhasilan pembuatannya dikonfirmasi secara akurat dengan restriksi BamHI, pengurutan DNA dan qPCR. Analisis statistik menunjukkan reprodusibilitas dan repeatabilitas yang tinggi dengan %CV inter-assay dan intra-assay yang keduanya memiliki nilai kurang dari 25%. Hasil ini menunjukkan bahwa kontrol positif yang dikonstruksi dapat diaplikasikan untuk deteksi PIK3CA wild-type dan H1047R secara simultan dengan tingkat presisi yang baik. Kontrol positif ini memiliki beberapa kelebihan, di antaranya mudah untuk dikonstruksi dan ekonomis. | id |
