Toksisitas Sel dan Respon Biologis Domba Setelah Pemasangan Perancah Tulang Komposit Polimer Dengan Bioaktif Progesteron dan Prostaglandin.

Abstract

Kehilangan jaringan tulang berukuran besar menyebabkan proses penyembuhan terganggu. Keterbatasan cangkok tulang autologus dan alogenik mendorong pengembangan perancah tulang biodegradabel yang sekaligus berfungsi sebagai wahana penghantaran agen bioaktif lokal. Penelitian ini bertujuan mengembangkan dan mengevaluasi perancah tulang komposit polycaprolactone/polyethylene glycol/Chitosan (PCL/PEG/Kitosan) yang dimuati agen bioaktif progesterone (P4), prostaglandin E1 (PGE1), dan/atau prostaglandin F2a (PGF2a) serta iopamidol sebagai agen radiopak, melalui dua tahap evaluasi yaitu uji sitotoksisitas in vitro, dan uji efikasi keamanan in vivo. Perancah tulang difabrikasi dengan rasio PEG:PCL:Kitosan 56%:30%:14% menjadi delapan kelompok formulasi (KP, P4, PGF2a, PGE1, P4/PGE1, P4/PGF2a, dan BW sebagai pembanding klinis). Sitokompatibilitas dievaluasi terhadap sel fibroblas 3T3- NIH melalui uji WST-8 pada lima titik waktu perendaman (1, 3, 7, 14, 28 hari) dan tiga waktu inkubasi (24, 48, 72 jam), sementara efikasi dan keamanan in vivo dievaluasi pada 16 ekor domba Garut jantan model defek tibialis 6mm melalui pemantauan radiografi berkala (hari ke-0 hingga ke-168) serta 32 parameter hematologi dan 25 parameter kimia darah. Uji WST-8 menunjukkan seluruh kelompok perancah tulang bersifat tidak sitotoksik terhadap sel 3T3-NIH pada hari perendaman 14 dan 28, dengan peringkat % viabilitas sel tertinggi pada kelompok P4/PGE1 (113,6%), diikuti PGE1 (106,1%) dan P4 (99,9%). Evaluasi in vivo menunjukkan densitas radiografik tulang regenerat meningkat progresif pada seluruh kelompok bioaktif, dengan skor komposit densitas tertinggi juga dicapai kelompok P4/PGE1, sementara dari 57 parameter darah yang diuji hanya sembilan (RDW-SD, PDW, IPF, neutrophil#, eosinophil#, eosinophil%, A/G, CK, Ca×P (˜15%) menunjukkan efek kelompok yang signifikan, mendukung profil keamanan sistemik yang baik; peningkatan creatine kinase (CK) yang teramati di seluruh kelompok termasuk kontrol merupakan respons fisiologis terhadap trauma bedah, bukan efek toksik agen bioaktif. Secara keseluruhan, kombinasi progesteron dan Prostaglandin E1 (P4/PGE1) muncul sebagai kandidat formulasi paling menjanjikan karena menggabungkan efikasi osteogenik lokal tertinggi dengan profil keamanan sistemik yang setara kelompok kontrol.

Extensive loss of bone tissue compromises the healing process, and the inherent limitations of autologous and allogeneic bone grafts have driven the development of biodegradable scaffolds that concurrently serve as vehicles for local bioactive delivery. This study aimed to develop and evaluate a polycaprolactone/polyethylene glycol/chitosan (PCL/PEG/chitosan) composite scaffold loaded with progesterone (P4), prostaglandin E1 (PGE1), and/or prostaglandin F2a (PGF2a), together with iopamidol as a radiopaque agent, through two sequential stages of evaluation: in vitro cytotoxicity testing, and in vivo efficacy and safety assessment. Scaffolds were fabricated at a PEG:PCL:chitosan ratio of 56%:30%:14% into eight formulation groups (KP, P4, PGF2a, PGE1, P4/PGE1, P4/PGF2a, and BW as the clinical comparator). Cytocompatibility toward 3T3-NIH fibroblasts was assessed with the WST-8 assay at five immersion time points (1, 3, 7, 14, and 28 days) and three incubation periods (24, 48, and 72 h). In vivo efficacy and safety were evaluated in 16 male garut sheep with a 6 mm tibial defect model through serial radiographic monitoring (days 0–168) and analysis of 32 hematological and 25 blood- chemistry parameters. The WST-8 assay showed that all scaffold groups were non-cytotoxic to 3T3-NIH cells at immersion days 14 and 28. Cell viability was highest in the P4/PGE1 group (113.6%), followed by PGE1 (106.1%) and P4 (99,9%). In vivo, the radiographic density of regenerated bone increased progressively in all bioactive groups, and the P4/PGE1 group again achieved the highest composite density score. Of the 57 blood parameters examined, only nine (˜15%) exhibited a significant group effect: RDW-SD, PDW, IPF, absolute neutrophils, absolute eosinophils, eosinophil percentage, A/G ratio, CK, and Ca×P. These findings support a favorable systemic safety profile. The elevation in creatine kinase (CK) observed across all groups, including the controls, was interpreted as a physiological response to surgical trauma rather than a toxic effect of the bioactive agents. Overall, the combination of progesterone and Prostaglandin E1 (P4/PGE1) emerged as the most promising formulation, combining the highest local osteogenic efficacy with a systemic safety profile comparable to that of the control group.