Ekspresi Gen Protease Bacillus pumilus Y1 dalam Escherichia coli DH5alfa : Orientasi Gen dan Pengaruh Penambahan IPTG (Isopropilthiogalaktosida)

Abstract

Bacillus pumilus Y1 yang diisolasi dari limbah cair tahu di Indonesia diketahui menghasilkan protease s e ~ p asu btilisin (Likumahwa, 1993; Ristiarini, 1996). Gen penghasil protease serupa subtilisin berukuran 3 kilo pasangbasa (kb) telah dicoba diklon dari B. pwnilus Y1 ke &lam Escherichia coli DH5a (Naibaho, 1997). Gen baukwan 3 kb tersebut dipotong dengan enzim restriksi EcoRI, diligasikan pada vektor pUC19, dan ditransformasikan ke &lam E. coli DH5a. Plasmid rekombinan yang dihasiikan disebut pBN1. Ekspresi protease dari pBNl temyata tidak sebaik protease asalnya. Untuk itu, dilakukan penelitian untuk mempelajari orientasi gen dan pengaruh penambahan IPTG (isopropilthiogalaktosida) terhadap ekspresi gen tersebut, dengan harap akan memperbaiki ekspresi dan meningkatkan produksi enzimnya.