Telaah pemulihan aktivitas protease Escherichia coli DH5x rekombinan

Abstract

Pengklonan gen protease Xanthomonas campestris pv. glycines IFL ke dalam E. coli DH5a dimaksudkan untuk meningkatkan produksi dan aktivitas enzim tersebut. Pengklonan tersebut telah berhasil dilakukan dimana fragmen EcoR1 berukuran 6,2 kb dari kromosom Xanthomonas campestris pv. glycines IFL digabungkan dengan vektor pRK 415 (10,5 kb; resisten terhadap tetrasiklin) yang telah dilinierkan dengan EcoRI lalu ditransformasikan ke dalam Escherichia coli DH5a sehingga dihasilkan Escherichia coli DH5a rekombinan (pMB8) yang mengandung insert berukuran 2,9 kb. Penelitian ini bertujuan untuk memperbaiki ekspresi protease rekombinan dengan cara: (1) melakukan subkloning insert dengan menggunakan vektor pIT101 (6,144 kb; resisten terhadap kanamisin dan gentamisin) dan inang E. coli JM107 serta (2) pemulihan/renaturasi aktivitas protease rekombinan. Target yang ingin dicapai ialah: (1) ukuran fragmen DNA penyandi protease yang lebih pendek daripada ukuran insert awal (2,9 kb) dan (2) peningkatan aktivitas protease rekombinan...