Karakterisasi Beberapa Fraksi Protease Eschericlzia Coli Dh5a Rekombinan Hasil Kloning Dari DNA Tanah Black Water Ecosystem Kalimantan

Abstract

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengkarakterisasi sifat - sifat biokimia dari fraksi - fraksi protease E.coli DH5a rekombinan hasil kloning DNA tanah dari Black Water Ecosystem Kalimantan. Fraksi - fraksi protease tersebut diperoleh dari pemisahan dengan elektroforesis SDS-PAGE. Protease diproduksi dengan menumbuhkan pada media Luria Bertani Broth yang ditambah dengan antibiotik ampicillin hingga konsentrasi 100 pg/ml. Produksi protease dilakukan pada media Luria Bertani Broth 10% dengan penambahan 0.5% W O 4 , skim 1% dan CaClz 2mM selaina 24 jam pada suhu 37' C. Filtrat hasil fermentasi disentrifugasi dingin suhu 0-4°C dengan kecepatan 1500g selama 15 inenit untuk memperoleh supernatan bebas sel. Protein filtrat diendapkan dengan amoniuin sulfat 40%. Endapan yang diperoleh kemudian dipisahkan lagi dengan sentrifugasi dingin suhu 0-4°C 1500g selama 15 inenit. Enzim kemudian didialisis untuk menghilangkan garam dan molekul protein berukuran kurang dari 12 kD.