Uji Koaglutinasi untuk Deteksi Vitelogenin dan Penentuan Kelamin Ikan Ringau (Datnioides microlepis)

Abstract

Ikan ringau atau tiger fish (Datniodes microlepis) tergolong dalam famili Datnioididae. Hingga saat ini ikan ringau termasuk kategori ikan monomorfik, yaitu tidak dapat dibedakan kelamin jantan betinanya berdasarkan ciri morfologi. Hal ini menjadi kendala dalam upaya budidaya, di mana tidak diketahuinya kelamin ikan Ringau akan menyebabkan kesulitan dalam penetapan seks rasio, intervensi hormonal yang tepat dan upaya budidaya yang efektif. Masalah ini perlu dipecahkan melalui penelitian yang fokus dalam hal identifikasi faktor pembeda kelamin pada ikan. Salah satu parameter yang dapat jadi acuan identifikasi kelamin ini adalah Vitelogenin (Vtg) yang dihasilkan dalam proses pematangan gonad ikan betina. Vitelogenin sebagai protein khas penanda kelamin betina dapat dideteksi dengan menggunakan uji koaglutinasi. Penelitian ini bertujuan untuk mendeteksi Vtg dengan uji koaglutinasi hingga kelamin ikan ringau dapat dideteksi . Penelitian ini dilakukan selama sembilan bulan dari Desember 2013 hingga Agustus 2014. Stimulasi hormon untuk merangsang produksi Vtg dilakukan pada tiga ekor ikan uji dengan menggunakan hormon 17β-Estradiol. Purifikasi Vtg diperoleh melalui proses SDS-PAGE dan elektroelusi. Analisis kuantitatif untuk mengukur kadar Vtg murni hasil purifikasi dilakukan pada panjang gelombang 280 nm. Imunisasi tiga ekor kelinci secara intra auricularis dilakukan untuk memperoleh anti-Vitelogenin. Uji spesifitas antibodi dilakukan dengan metode Agar Gel Precipitation Test (AGPT) dengan mereaksikan serum yang mengandung anti-Vtg dengan sampel positif Vtg dan sampel negative (kontrol). Uji koaglutinasi dilakukan dengan memasangkan antara Protein A yang terdapat pada bakteri Staphylococcus aureus dengan anti-Vtg. Suspensi ini direaksikan dengan sampel positif (Vtg) dan kontrol beserta 13 sampel ikan uji yang akan ditentukan kelaminnya. Analisis histologi gonad dari 13 ekor ikan uji dilakukan untuk memvalidasi hasil uji koaglutinasi. Analisis hasil dilakukan secara deskriptif. Produksi Vtg berhasil dilakukan dan ketiga ekor ikan yang diberi stimulasi hormon 17β-Estradiol menunjukkan positif menghasilkan Vtg yang melimpah berdasarkan hasil SDS-PAGE. Ikan ringau memiliki dua jenis Vtg yaitu Vtg1 dengan berat molekul 180 kDa dan Vtg2 dengan berat molekul 110 kDa. Vtg yang dipurifikasi adalah Vtg1 karena berdasarkan pengujian sebelumnya, antibodi dari Vtg1 juga mengenali Vtg2. Purifikasi berhasil dilakukan dengan kisaran konsentrasi Vtg yang direcovery berkisar antara 0.186 - 0.733 mg/mL. Vtg murni ini berhasil menstimulasi produksi anti-Vtg pada kelinci uji. Hal ini ditunjukkan dari hasil uji AGPT dimana garis presipitasi hanya di sekeliling sumur yang didalamnya terdapat Vtg. Hasil pengujian koaglutinasi memperlihatkan bahwa reaksi antara anti-Vtg dengan Vtg menunjukkan pembentukan koaglutinasi, sedang interaksi anti-Vtg dengan kontrol tidak membentuk koaglutinasi. Dari uji koaglutinasi terhadap plasma 13 ekor ikan uji, dideteksi sembilan ekor ikan uji positif dan empat ekor ikan uji negatif. Hasil analisis histologi gonad menunjukkan bahwa ikan uji yang terdeteksi positif membentuk koaglutinasi merupakan ikan betina dan yang tidak membentuk koaglutinasi adalah ikan jantan. Berdasarkan validasi hasil uji koaglutinasi dan histologi gonad didapatkan bahwa sensitifitas dan spesifisitas uji ini masing-masing 100% dengan batas deteksi ikan uji yaitu 100 gram. Hasil ini dapat dikembangkan sebagai dasar pembuatan prototipe kit deteksi cepat Vtg dengan metode koaglutinasi. Penemuan ini memberikan satu cara baru uji cepat dalam mendeteksi Vtg dan identifikasi kelamin ikan ringau melalui uji koaglutinasi.