Transfer DNA Bacillus licheniformis ke dalam sel Escherichia coli dengan menggunakan MgCl2 dan PEG - 6000

Abstract

Penelitian ini mencoba mentransformasikan sifat genetik yang ada pada Bacillus licheniformis ke dalam sel Escherichia coli dengan perlakuan MgCl2 dan PEG-6000. Sifat genetik utama yang diharapkan tertransformasi adalah enzim protease pada B. licheniformis ke dalam sel E. coli yang semula tidak memiliki sifat proteolitik. Proses transformasi dimulai dengan mengisolasi DNA B. licheniformis dengan menggunakan sodium dodesil sulfat 25 persen untuk memecah dinding dan membran sel. Agar dinding sel lebih mudah pecah, sebelum penambahan sodium dodesil sulfat 25 persen dilakukan sonikasi pada frekuensi 100 kHz selama 8 10 menit. DNA diekstrak dari campuran komponen- komponen sel lainnya dengan menggunakan pelarut-pelarut organik, yaitu sodium perklorat 5M dan kloroform-isoanil alkohol (24: 1) serta sentrifusi, selanjutnya DNA digumpal- kan dengan campuran etanol 70 persen NaCl 5M (10:1). Pembentukan protoplas E. coli dilakukan dengan menggunakan enzim lisosim 10 mg/ml bufer TEN untuk memecah dinding sel dan protoplas yang diperoleh disuspensikan dalam larutan sukrosa 1M MgCl2 0.04M (1:1) untuk mencegah lisis karena tekanan osmosis. Transformasi dilakukan pada suhu kamar ...