Kajian transfer DNA Bacillus licheniformis ke dalam sel Escherichia coli dengan penggunaan CaCl2

Abstract

Penelitian ini dilakukan untuk mempelajari kemung- kinan keberhasilan transformasi DNA antara spesies bak- teri yang berbeda dengan menggunakan metoda pembentukan spheroplas oleh CaCl₂, yaitu dengan menggunakan Bacillus licheniformis sebagai donor DNA dan Escherichia coli sebagai sel inang. Selain itu juga bertujuan untuk memperoleh sel hasil transformasi DNA yang mempunyai aktivitas proteolitik yang tinggi. Penelitian pendahuluan yang dilakukan meliputi isolasi DNA dari Bacillus licheniformis dan karakterisasi DNA yang diperoleh. DNA dari Bacillus licheniformis diperoleh dengan terlebih dahulu memecah dinding sel bakteri dengan menggunakan SDS 25% dan sonikasi. DNA yang tercampur dengan komponen-komponen lainnya diekstrak dengan menggunakan pelarut-pelarut organik yaitu kloro- form: isoamilalkohol (24:1). Karakterisasi DNA yang peroleh dilakukan dengan metoda karakterisasi di- secara spektrofotometri dimana DNA dilarutkan dalam buffer potasium fosfat dan diukur absorbansinya pada panjang gelombang 200 300 nm juga karakterisasi dengan menggunakan Etidium Bromida, yaitu DNA dilarutkan dalam larutan. Etidium Bromida kemudian dibandingkan fluoresensinya di bawah sinar ultra violet.