Unjuk Kinerja Intrumen UHPLC untuk Analisis Kadar Mikrosistin Spirulina

Abstract

Mikrosistin adalah hepatotoksin monosiklik heptapeptida yang mengontaminasi spirulina sebagai salah satu sumber pangan yang dapat berefek baik pada kesehatan. Metode yang digunakan untuk proses analisis senyawa mikrosistin-LR dan mikrosistin-RR yaitu dengan Ultra High Performance Liquid Chromatography (UHPLC). Metode analisis ini dapat digunakan secara rutin di laboratorium jika uji unjuk kinerja UHPLC dilakukan terlebih dahulu agar kinerja alat dapat dipastikan sebelum digunakan untuk analisis. Tujuan dari penelitian ini melakukan uji unjuk kinerja instrumen UHPLC sebagai dasar untuk validasi metode analisis kadar mikrosistin-LR dan mikrosistin-RR pada spirulina. Tahapan penelitian yang dilakukan yaitu penentuan kondisi instrumen, uji unjuk kinerja UHPLC dengan larutan standar mikrosistin-LR dan mikrosistin-RR, serta analisis data. Kondisi instrumen sudah memenuhi kriteria kromatografi yang ideal. Hasil uji unjuk kinerja instrumen menunjukkan linearitas yang baik dengan R2 lebih dari 0,995 untuk setiap senyawa. Selain itu, instrumen UHPLC juga memiliki presisi yang baik dengan nilai RSD kurang dari 2% untuk kedua senyawa, baik luas area maupun waktu retensi. Limit deteksi (iLOD) instrumen untuk mikrosistin-LR dan mikrosistin-RR secara berturut-turut adalah 0,04 µg/ml dan 0,08 µg/ml, sedangkan limit kuantifikasi (iLOQ) dua senyawa berturut-turut adalah 0,13 µg/ml dan 0,26 µg/ml. Hasil uji unjuk kinerja UHPLC dapat digunakan sebagai dasar untuk validasi metode analisis mikrosistin-LR dan mikrosistin-RR pada spirulina.

Microcystins are heptapeptide monocyclic hepatotoxins that contaminate spirulina as one of the food sources that can have a good effect on health. The method used for the analysis of microcystin-LR and microcystin-RR compounds is Ultra High Performance Liquid Chromatography (UHPLC). This method can be used in the laboratory if the UHPLC performance test is done first so that the performance of the device can be ascertained before being used for analysis. The purpose of this study was to test the performance of the UHPLC instrument as a basis for validating the method for analyzing microcystin-LR and microcystin-RR levels in spirulina. The research stages are determining the condition of the instrument, UHPLC performance test with microcystin-LR and microcystin-RR standard solutions, and data analysis. The condition of the instrument has met the ideal chromatographic criteria. The results of the instrument performance tests showed good linearity with R2 more than 0.995 for each compound. In addition, the UHPLC instrument has good precision with an RSD value of the compounds are less than 2%, both for area and retention time. The detection limits (iLOD) of the instrument for microcystin-LR and microcystin-RR respectively were 0.04 µg/ml and 0.08 µg/ml, while the quantification limits (iLOQ) of the two compounds were 0.13 µg/ml and 0.26 µg/ml. The results of the UHPLC performance test can be used as a basis for validating the microcystin-LR and microcystin-RR analysis methods on spirulina.