Ekspresi Gen Sintetik Penyandi Nukleokapsid SARS-CoV-2 Di Escherichia coli

Abstract

SARS-CoV-2 adalah virus yang menyebabkan pneumonia akut pada manusia yang dikenal sebagai penyakit COVID-19. Salah satu upaya dalam penanganan COVID-19 adalah dengan menyediakan bahan uji diagnostik berupa uji serologis. Pemeriksaan ini penting untuk mengidentifikasi yang dapat digunakan untuk uji serologis adalah protein N sebagai protein struktural virus SARS-CoV-2. Salah satu komponen utama yang dapat digunakan untuk uji serologis tersebut diantaranya antigen asal protein N sebagai protein struktural virus SARS-CoV-2. Penelitian ini bertujuan untuk membuat protein rekombinan N SARS-CoV- 2 menggunakan sistem ekspresi Escherichia coli. Sebanyak 1089 nukleotida yang mengkode 362 asam amino N SARS-CoV-2 dioptimasi kodonnya, disintesis, dan diklon ke vektor pET-14b. Plasmid tersebut kemudian diekspresikan dalam E.coli BL21DE3 dan diinduksi dengan 1.0 mM Isopropyl-d-1-thiogalactopyranoside (IPTG). Sel diperoleh dilisis menggunakan bufer denaturasi yang mengandung 7 M urea karena terindikasi adanya pembentukan badan inklusi pada protein target. Protein rekombinan yang diperoleh selanjutnya didialisis untuk menghilangkan pengotor dan dipekatkan menggunakan PEG-6000 yang menghasilkan rendelmen 0.992 mg/mL. Analisis protein rekombinan N SARS-CoV-2 dilakukan menggunakan teknik SDS-PAGE yang menghasilkan protein target berupa protein spesifik 37 kDA. Aplikasi protein rekombinan N SARS-CoV-2 pada teknik ELISA terhadap sampel serum darah manusia menunjukan terjadinya reaksinya antigen-antibodi dengan hasil rata-rata densitas optik yaitu ada 0.603 pada orang yang divaksinasi dan 0.135 pada orang yang tidak divaksinasi. Penelitian ini mengungkapkan bahwa produksi protein rekombinan N SARS-COV-2 dapat dilakukan dalam sistem ekspresi E.coli dalam kondisi terdenaturasi, sehingga metode tersebut lebih efektif dalam memproduksi protein sebagai bahan dasar dalam pengujian imunodiagnostik.