Identifikasi Populasi Mutan Artemisia annua L. Hasil Induksi Sistem CRISPR.

Abstract

Artemisia annua L. (A annua) adalah tanaman yang mengandung artemisinin, senyawa yang efektif mengobati malaria. Walaupun demikian, kandungan artemisinin sangat kecil pada A annua. Dalam rangka meningkatkan kandungan artemisinin, dilakukan rekayasa jalur metabolik dengan sistem clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR). Tujuan penelitian ini adalah mengidentifikasi tanaman populasi A annua yang mengalami mutasi setelah diinduksi oleh sistem CRISPR. Penelitian ini dimulai dengan preparasi benih, sterilisasi benih, isolasi DNA tanaman, optimasi suhu annealing primer, amplifikasi DNA tanaman, dan analisis dengan elektroforesis. Identifikasi yang dilakukan menunjukkan bahwa terdapat 46 tanaman yang berhasil diamplifikasi dan sebanyak 24 tanaman lainnya tidak berhasil diamplifikasi. Ukuran amplikon artemisia adalah berkisar 700 bp sedangkan ukuran amplikon plasmid yang merupakan kontrol positif hanya berkisar 500 bp. Sebanyak 46 sampel DNA kembali diamplifikasi dan dianalisis dengan elektroforesis QIAxcel. Sebanyak 39 sampel ditemukan mengalami mutasi. Ukuran basa nukleotida bervariasi yaitu 465 bp, 466 bp, 467 bp, dan 468 bp sedangkan ukuran plasmid adalah 468 bp.