Delesi Sinyal Sekresi Gen CalBsyn dalam Plasmid pGAPZα-proCalBsyn-egfp melalui Teknik Mutagenesis Terarah.

Abstract

ProCalBsyn merupakan gen penyandi Candida antartica lipase B yang dibuat secara sintetik dalam plasmid pGAPZα-proCalBsyn-egfp (4839 bp). Sekuen proCalBsyn masih mengandung sinyal sekresi native (ss-CalBsyn), sementara plasmid pGAPZα memiliki sinyal sekresi mating-factor-α.(MFα). Tujuan dari penelitian ini adalah mendelesi sinyal sekresi ss-CalBsyn, mengintroduksi situs EcoRI serta transformasi plasmid mutan ke E.coli TOP10F’. Delesi ss-CalB dilakukan dengan teknik mutagenesis terarah melalui proses PCR. Sepasang primer F-mCalB dan R-mCalB serta high-fidelity DNA-polymerase G-Hifi digunakan untuk amplifikasi. Hasil amplifikasi PCR diperoleh plasmid mutan berupa DNA linear berukuran 4780 bp. Setelah direstriksi dengan enzim EcoRI dan ligasi, plasmid mutan ditransformasikan kembali ke E.coli. Transformasi menghasilkan lebih dari 60 koloni transforman. Analisis PCR menunjukkan 3 dari 9 klon hasil isolasi plasmid yang dianalisis terindikasi membawa plasmid mutan yaitu klon 7, 19 dan 20. Ketiga klon tersebut menunjukkan adanya pita gen mCalBsyn (970 bp).