Purifikasi Dan Karakterisasi Katalase Dari Isolat Lokal Kapang Neurospora Crassa Inacc F226
View/ Open
Date
2016Author
Santoso, Pugoh
Ambarsari, Laksmi
Suryani
Yopi
Metadata
Show full item recordAbstract
Katalase (hidrogen peroksida oksidoreduktase; EC1.11.1.6) merupakan
kelompok oksidoreduktase yang berfungsi mengkatalisis reaksi perubahan
hidrogen peroksida (H2O2) menjadi air dan oksigen. Aplikasinya yang luas,
seperti pada industri pulp & paper, tekstil, farmasi, biosensor, bioremediasi dan
pangan, menjadikan enzim ini prospektif untuk dikembangkan. Indonesia
memiliki kekayaan mikrob yang melimpah dapat dijadikan sebagai sumber
penghasil enzim ini. Oleh karena itu, perlu dilakukan eksplorasi terhadap isolat
lokal dalam menghasilkan katalase. Penelitian ini bertujuan untuk produksi
katalase dari isolat lokal kapang Neurospora crassa InaCC F226 pada media
Vogel, pemurnian dengan gel filtrasi, karakterisasi enzim terhadap suhu, pH,
logam, kinetika reaksi (Vmaks dan Km) dan prediksi jenis katalase berdasarkan
berat molekulnya.
Produksi katalase dilakukan dengan menumbuhkan Neurospora crassa
InaCC F226 pada media Vogel selama 5 hari yang ditambah dengan 1,5%
sukrosa. Biomassa yang diperoleh dilarutkan dalam 3% hidrogen peroksida,
kemudian sel dilisis menggunakan sonikator. Enzim kasar yang terbentuk
diendapkan dengan 60% amonium sulfat dan dilanjutkan dengan pemurnian
menggunakan kromatografi gel filtrasi dengan matriks Sephadex G-75. Eluen
Sephadex G-75 fraksi 16 merupakan puncak protein dengan aktivitas katalase
tertinggi. Kemurnian katalase setelah pemurnian mencapai 10,7 kali dengan
perolehan 21,7% dan aktivitas spesifik sebesar 1464,9 U/mg.
Karakterisasi dilakukan dengan menggunakan fraksi amonium sulfat
kejenuhan 60%. Aktivitas katalase Neurospora crassa InaCC F226 optimum
pada pH 7, suhu 40oC, dan stabilitas katalase terhadap suhu diperoleh pada suhu
35oC dan 40oC yang diinkubasi selama 2 jam. Ion Fe+2 dan Ca+2 merupakan
aktivator katalase sedangkan EDTA, Cu+2 dan Mn+2 bersifat inhibitor bagi
katalase. Nilai Km dan Vmaks katalase Neurospora crassa InaCC F226
menggunakan substrat hidrogen peroksida berturut-turut adalah 8,8 mM dan 5,7
s.mM-1. Berat molekul katalase Neurospora crassa InaCC F226 adalah 59,4 kDa.