Inhibisi Histon Asetiltransferase Oleh Kuersetin Sebagai Kandidat Antikanker Secara In Silico Dan In Vitro.

Abstract

Histon asetiltranferase p300-CBP-associated factor (HAT PCAF) mengkatalisis transfer asetil dari asetil KoA ke residu lisin pada histon. Asetilasi histon berperan penting dalam aktivasi transkripsi DNA. Kesalahan pada enzim ini, seperti hiperasetilasi, dapat menyebabkan peningkatan proliferasi sel yang menyebabkan perkembangan sel kanker. Jenis HAT yang paling banyak terdapat pada manusia adalah HAT p300 dan PCAF. Kuersetin menunjukkan potensi penghambatan terhadap HAT p300 pada penelitian sebelumnya, namun pengaruhnya terhadap HAT PCAF belum dilakukan. Oleh karena itu, penelitian ini menggunakan kuersetin untuk menghambat aktivitas HAT PCAF. Penelitian ini menggunakan teknik in silico dan in vitro untuk menguji potensi kuersetin sebagai inhibitor HAT PCAF. Uji in silico menggunakan penambatan molekuler untuk mendapatkan informasi mengenai model pengikatan kuersetin pada HAT PCAF. Selain itu, studi kinetika juga menghasilkan nilai konstanta inhibisi (Ki) kuersetin dan jenis inhibisinya. Penelitian kinetika inhibisi menggunakan metode fluorometri untuk mengukur inhibisi HAT PCAF oleh kuersetin. Hasil penambatan molekuler menunjukkan bahwa kuersetin dapat terikat pada situs pengikatan asetil KoA sehingga dapat menghambat aktivitas asetilasi histon oleh HAT PCAF. Kuersetin berinteraksi dengan asam amino Gln525 dan Cys574 pada rantai A, serta Cys574 and Gln581 pada rantai B HAT PCAF. Kuersetin juga terikat pada situs aktif histon melalui Asp610. Hasil uji kinetika inhibisi HAT PCAF menunjukkan bahwa kuersetin dapat menghambat reaksi asetilasi histon yang diamati dari intensitas fluoresens yang rendah. Analisis dengan plot Dixon menunjukkan bahwa kuersetin dapat berkompetisi dengan histon sehingga memiliki jenis inhibisi kompetitif, dengan nilai konstanta inhibisi (Ki) sebesar 9.575 μM. Hasil uji kinetika inhibisi menunjukkan kesesuaian dengan hasil penambatan molekuler, yaitu kuersetin memiliki kemampuan sebagai inhibitor kompetitif bagi HAT PCAF.