Pengaruh Mutasi D802N pada Aktivitas Polimerase DNA Pol I ITB-1

Abstract

Gen mutan D802N DNA Pol I ITB-1 telah dikonstruksi dan diekspresi secara heterolog di Escherichia coli. Ekstrak enzim kasar dari mutan ini telah dikarakterisasi dan menunjukkan adanya perbedaan sifat dibanding dengan ekstrak enzim kasar dari protein wild-type. pH dan suhu optimilln enzim mutan berturut-turut adalah 9,0 dan 50°C; Sedangkan enzim wild.:type 7,4 dan 65°C. Perubahan kondisi optimum ini menyebabkan turunnya aktivitas spesifik enzim mutan hingga 2,7 kali , yaitu dari 3,71 unit/mg protein untuk enzim wild-type menjadi 1,34 unit/mg protein untuk enzim mutan. Hal yang sama terjadi pada penentuan nilai Km dan Vmat. terhadap substrat (dNTP), sehingga effisiensi katalitik ~/Km) enzim mutan menurun ± 2 kali dibanding enzim wild-type. Mutasi D802N pada gen penyandi DNA Pol I ITB-1 menyebabkan afmitas enzim-substrat berkurang sehingga aktivitas enzim menurun dan enzim menjadi kurang stabil. 89