Konstruksi Mutan D802n Pada Gen Dna Pol I Bacillus thermoleovorans Isolat Lokal Dengan PCR Megaprimer

Abstract

Gen yang mengkode DNA Pol I dari Bacillus thermoleovorans isolat lokal telah diklon dan ditentukan urutan nukleotidanya. Gen tersebut diekspresikan di E.coli dan mernpunyai panjang 2631 bp yang mengkode 876 asarn amino dengan berat mokekul 97 KDa. Analisis homologi menunjukkan homologi yang tinggi dengan gen DNA polimerase pada bakteri dari kelompok Bacillus caldotenax (99%). Struktur-fungsi gen ini masih belum diketahui. Oleh sebab itu perlu dilakukan studi mutagenesis. Pada penelitian ini telah dilakukan mutasi terhadap salah satu asam amino yang Iestari dengan rnenggunakan PCR megaprimer. Asam amino aspartat pada posisi 802 dirnutasi menjadi asparagin. DNA Pol I mutan diperoleh setelah melalui dua kali proses PCR. Sedangkan untuk mengetahui keberhasilan mutasi dilakukan ligasi fragmen DNA hasil PCR ke dalam vector pGEM®-T, selanjutnya ditentukan urutan nukleotidanya. Dari penelitian ini diperoleh fragmen DNA dengan ukuran 2631 bp yang merupakan hasil amplifikasi PCR megaprimer. Sedangkan keberhasilan proses ligasi pada vector pGEM® -T ditunjukkan dengan hasil-hasil analisis restriksi dan hasil pengurutan nukleotida menunjukkan terjadinya mutasi.