Konstruksi Gen Penyandi Kitinase pada Vektor Ekspresi dengan Metode Gateway dan Transformasi pada Agrobacterium sp.

Abstract

Oil palm is an important industrial plants producing cooking oil, industrial oil, and fuel. An effort to increase the production of oil palm continuously, has been carried out through the protecting of pests and disease caused by Ganoderma spp and known the root-rot disease. One way to solve this problem is by gene construct in produce an antifungal substances that as one function of the gene chitinase. The objective of this research is to make the construction of gene chitinase in an expression vector by the rapid and directed Gateway Method. The full size gene chitinase of 1500 bp from the previous research by Novianthy (2009) was first inserted into a donor vector and then inserted into the expression vector. The characterization of expression vector inserted with gene chitinase was carried out which resulted in a DNA band of 1500 bp shown by PCR colony technique elektroforegram gene chitinase. An expression vector inserted with the gene chitinase was transformed into the Agrobacterium tumefaciens strain AGL-0. The PCR colony technique showed gene chitinase has been successfully inserted into A. tumefaciens. The gene chitinase ready transferred into plants.

Kelapa sawit merupakan tumbuhan industri penting penghasil minyak goreng, minyak industri, maupun bahan bakar. Usaha peningkatan produksi perkebunan kelapa sawit tersebut secara terus menerus dilakukan antara lain untuk mengatasi masalah hama dan penyakit yang disebabkan oleh Ganoderma spp yang dikenal dengan nama penyakit busuk akar. Salah satu cara untuk menanggulangi masalah ini adalah dengan menyisipkan gen penghasil zat yang berfungsi sebagai antijamur salah satunya yaitu gen penyandi kitinase. Penelitian ini bertujuan untuk membuat konstruksi gen penyandi kitinase dalam vektor ekspresi dengan metode Gateway yang cepat dan terarah. Gen penyandi kitinase yang berukuran 1500 pb dari penelitian sebelumnya oleh Novianthy (2009) terlebih dahulu disisipkan ke dalam vektor donor selanjutnya ke dalam vektor ekspresi. Pengujian gen penyandi kitinase yang telah tersisipkan ke dalam vektor ekspresi menghasilkan pita DNA berukuran 1500 pb yang ditunjukkan oleh elektroforegram PCR koloni gen penyandi kitinase. Vektor ekspresi yang telah tersisipi gen penyandi kitinase selanjutnya ditransformasikan ke dalam Agrobacterium tumefaciens galur AGL-0. Pengujian PCR koloni menunjukkan gen penyandi kitinase telah berhasil disisipkan pada A. tumefaciens. Gen penyandi kitinase siap ditransfer ke dalam tanaman.