Isolasi dan karakterisasi sekuens parsial cDNA hormon pertumbuhan ikan gurami Osphronemus gouramy

Abstract

Ikan gurami (Osphronemus gouramy) merupakan jenis ikan konsumsi yang memiliki nilai ekonomis yang tinggi. Namun demikian, pengembangan usaha ikan guranti masih mengalami hambatan yaitu membutuhkan waktu yang relatif lama dalam mencapai ukuran konsumsi. Masalah ini mungkin dapat diatasi dengan menggunakan teknik transgenesis. Tahapan awal yang harus dilakukan yaitu dengan pembuatan konstruksi DNA, salah satu komponen yang harus ada yaitu keberadaan gen target yang akan disisipkan, dalam ha1 ini GH (Growth Hormone) yang berasal dari ikan gurami. Dikarenakan gen GH yang berasal dari ikan gurami belum ada maka tahapan awal dalam mendapatkan gen tersebut adalah dengan isolasi cDNA (coinplementa~d eoxyribonzlcleic acid) GH ikan gurami. cDNA disintesis berdasarkan mRNA (messenger RNA) hasil ekstraksi kelenjar pituitari ikan gurami. mRNA spesifik digunakan sebagai cetakan bagi sintesis enzimatik DNA komplementer dengan menggunakan enzim reverse transkriptase. Selanjutnya cDNA di PCR dengan Primer Frl Forward 5'-RCAYCTBCACCWRHTSGC -3' dan API Reverse 5'-CCATCCTAATACGACTCACTATAGGGC- 3'. Produk PCR diligasi ke pGEM-T Easy, transformasi ke bakteri E. coli DHSa, identifikasi transforman, dan sekuensing. Hasil penelitian ini menunjukan bahwa fragmen cDNA GH parsial ikan gurami mempunyai ukuran 700 bp yang menyandikan 169 asam amino dan mengandung elemen-elemen yang konserf untuk gen GI-I. cDNA GH gurami memiliki kesamaan antara 95%-85% dengan ikan lainnya, dimana kesamaan tertinggi 95% adalah dengan ikan sepat rawa Trichogaster leerii.