Konstruksi dan Subkloning Gen GOx-Xho Penyandi Enzim Glukosa Oksidase ke dalam Plasmid pPICZα

Abstract

Glukosa oksidase (GOx; EC 1.1.3.4) adalah enzim yang mengoksidasi Dglukosa menjadi D-glukono-d-lakton dan menghasilkan hidrogen peroksida. Aktivitas enzim tersebut pada organisme asalnya, yaitu Aspergillus niger IPBCC 08.610, diketahui lebih tinggi secara intraseluler dibanding ektraselular sehingga upaya memproduksi GOx secara masif kurang efisien. Salah satu solusi dari permasalahan tersebut adalah dengan metode alternatif, yaitu produksi enzim GOx secara rekombinan. Penelitian ini bertujuan mengonstruksi ulang fragmen gen GOx dengan menambah situs restriksi XhoI menjadi GOx-Xho, mensubkloning gen tersebut ke dalam plasmid pPICZα, dan mentransformasi plasmid rekombinan ke dalam sel Escherichia coli DH5α. Konstruksi gen GOx dilakukan menggunakan metode PCR dalam dua tahap. Ligasi gen GOx dengan plasmid pPICZα dilakukan dengan dua perlakuan, yaitu dengan rasio 1:1 dan 1:3 antara plasmid dan gen. Hasil penelitian menunjukkan perbandingan plasmid dan gen yang optimal dalam subkloning adalah 1:3. Hasil subkloning berhasil ditransformasi ke dalam sel E. coli DH5α dan sel pembawa plasmid rekombinan pPICZα-GOx-Xho berhasil diperoleh.