Transformasi Gen P5CS1 Asal Tebu PSJT 941 dalam Kalus Tebu Kentung dan PS 864 Melalui Agrobacterium tumefaciens

Abstract

Gen P5CS berperan dalam biosintesis prolin yang terakumulasi saat tanaman mengalami kekeringan. Penelitian ini bertujuan melakukan transformasi gen P5CS1 asal tebu varietas PSJT 941 ke dalam kalus tebu varietas Kentung dan PS 864 melalui media Agrobacterium tumefaciens. Gen P5CS1 dikonstruksi ke dalam vektor plasmid pCAMBIA 1303. Penelitian diawali dengan transformasi plasmid rekombinan pCAMBIA-P5CS1 ke Agrobacterium tumefaciens LBA4404 melalui metode kejut panas. Plasmid rekombinan berhasil ditransformasikan ke dalam A. tumefaciens yang ditandai dengan tumbuhnya koloni bakteri berwarna putih pada media seleksi. Bakteri tersebut digunakan untuk mentransformasikan kalus tebu dengan cara merendam kalus ke dalam koloni bakteri. Kalus dipindahkan ke media seleksi yang mengandung higromisin 50 ppm. Keberhasilan transformasi plasmid rekombinan pCAMBIA-P5CS1 ke dalam kalus ditunjukkan dengan terbentuknya pita DNA berukuran sekitar 2300 bp untuk gen P5CS1 dan berukuran 500 bp untuk gen hpt. Transformasi plasmid rekombinan ke dalam kalus tebu belum berhasil dilakukan karena pita DNA untuk gen P5CS1 dan gen hpt tidak terbentuk pada sampel kalus.