Isolasi imunoglobulin kelinci yang disuntik dengan Streptococcus Pyogenes

Abstract

Tujuan penelitian ini ialah mempelajari pembentukan antibodi poliklonal, reaksi serum kelinci dengan Strepto- coccus pyogenes didalam medium agar, dan teknik pemurnian serum anti bakteri tersebut yang terbentuk dalam kelinci dengan protein A-Sepharosa dan elektroforesis SDS-PAGE. Hewan percobaan yang dipakai adalah 10 ekor kelinci putih jantan hasil perkawinan silang antara Ras New Zea- land-white dan kelinci lokal keturunan ras, rata-rata berumur 2 bulan dan diperoleh dari Balai Penelitian Ternak (BPT) dan Hijauan Makanan Ternak (HMT) Ciseureuh-Cianjur, Bandung. Pembuatan serum anti bakteri dilakukan dengan cara menyuntikkan bakteri Streptococcus pyogenes pada kelinci. Untuk mengetahui ada atau tidaknya serum anti bakteri yang terbentuk, dilakukan uji dengan metode difusi ganda Ouch- terlony dalam medium agar. Apabila terbentuk serum anti bakteri, akan terlihat garis presipitasi, dan selanjutnya dilakukan proses pemurnian dengan menggunakan salting out; kromatografi filtrasi gel; kromatografi afinitas. Pengujian elektroforesis kemurnian serum anti bakteri dengan SDS-PAGE; immunoelektroforesis; metoda difusi ganda Ouchterlony; serta menentukan bobot molekul (BM) dan konsentrasi telah dimurnikan. protein serum anti bakteri yang Hasil elektroforesis SDS-PAGE 8% dari serum anti bakteri yang telah dimurnikan, memperlihatkan dua sub-unit yang berbeda (dimer) dengan bobot molekul (BM) sebesar 42.471 dan 32.726. Hasil imunoelektroforesis menunjukkan satu busur presipitasi dari globulin, dan pada pengujian serum anti bakteri yang telah dimurnikan dengan metoda difusi ganda Ouchterlony menunjukkan adanya interaksi antara antigen dan imunoglobulin. Penetapan konsentrasi protein serum anti bakteri dengan metoda Bradford, menunjukkan penurunan yang berbeda-beda pada setiap proses pemurnian.