Pengklonan Gen Kitinase Bakterial Menggunakan Teknik Mutagenesis Transposon Dan DNA Pelacak Heterologus

Abstract

Enzim kitinase bakteri banyak dimanfaatkan dalam berbagai aspek, antara lain untuk mengkonversi kitin menjadi produk turunannya yang berguna dan bernilai ekonomi tinggi. Selain itu biodegradasi kitin ini juga penting untuk mengendalikan cendawan patogen dan serangga hama tertentu yang sensitif terhadap kitinase. Penelitian ini dilakukan dalam dua rangkaian percobaan yaitu (1) pengklonan gen kitinase bakteri isolat CS, (2) penapisan dan pengklonan gen kitinase isolat bakteri asal tanah. Sedangkan tujuan penelitian ini adalah (1) mengisolasi gen kitinase dari bakteri isolat CS dengan memanfaatkan transposon Tn5-mini, (2) mengisolasi dan mengklon gen kitinase bakteri asal tanah dengan memanfaatkan DNA pelacak heterologus, dan (3) mempelajari ekspresi gen kitinase pada E. coli DH5α. Analisis sekuen 16S-rDNA pada isolat CS memperlihatkan bahwa isolat CS paling sekerabat dengan Aeromonas sobria. Mutagenesis transposon menggunakan pUT mini-Tn5 Km1 pada A .sobria CS menghasilkan tiga mutan yang tidak mampu lagi membentuk halo pada medium Agar Kitin dengan frekuensi transkonjugasi sebesar 7.59 x 107. Ketiga jenis mutan ini telah diverifikasi dengan PFGE (Pulsed - Field Gel Electrophoresis ) dan diberi nama chil, chi4 dan chi6. Dari hasil analisis hibridisasi Southern pada masing-masing genom mutan dengan menggunakan gen Km' dari plasmid PUC4K sebagai pelacak, diperoleh fragmen DNA yang membawa transposon hasil potongan Enzim….dst