Pencirian Gen Serupa Subtilisin Pada Sejumlah Isolat Lokal Bakteri Proteolitik

Abstract

Pencarian jenis mikroba asal Indonesia sebagai sumber protease serin serupa sub- tilisin, dilakukan dengan melacak keberadaan gen penyandi enzim serupa subtilisin melalui hibridisasi Southern dan pengujian aktivitas protease dengan penghambat spesifik serin, fenilmetilsulfonil fluorida (PMSF). Sebagai pelacak adalah fragmen DNA penyandi gen subtilisin BPN yang terdapat dalam plasmid pPT30, pada situs EcoRI, berukuran 3.0 kilo pasang basa (Kb). Konsentrasi PMSF yang digunakan dalam pengujian penghambatan aktivitas protease adalah 1 mM dan 5 mM. Pada penelitian ini digunakan 25 isolat bakteri, yang terdiri dari 21 isolat Bacillus sp. dan 4 isolat Vibrio harveyi. Semua isolat bakteri diisolasi dari berbagai tempat di Indonesia. Isolat-isolat tersebut mengeluarkan enzim protease yang ditandai dengan terbentuknya areal bening (halo) di sekitar koloni pada media skim milk agar (SMA) dan aktivitas optimum protease pada pH 8.0. Protease dari keempat isolat Vibrio harveyi tidak menunjukkan penghambatan de- ngan penambahan 1 mM PMSF dan 5 mM PMSF. Penambahan 1 mM PMSF mengakibatkan penghambatan aktivitas protease B. licheniformis MD15 sebesar 49.89% dan protease B. pumilus Y1 mengalami penghambatan sebesar 43.96% (B. subtilis kontrol mengalami penghambatan aktivitas sebesar 40%). Penambahan 5 mM PMSF mengakibatkan peng- hambatan aktivitas lebih dari 40% untuk protease dari B. pumilus (BK1, M, MD13p, $1, Y1 dan Y3), B. brevis (BK2, MD21.2), B. stearothermophilus JD, B. licheniformis (MD13k, MD15, R1), B. subtilis N dan B. sphaericus S3. Protease B. pumilus Y1 mengalami penghambatan aktivitas terbesar dibandingkan dengan protease yang dihasilkan oleh isolat lainnya dengan penambahan 5 mM PMSF. Aktivitas tersisa dari protease B. pumilus Yl dengan penambahan 5 mM PMSF sebesar 27.2% (B. subtilis kontrol memberikan aktivitas tersisa sebesar 4.10%)….dst