Kloning gen-gen yang responsif cekaman kekeringan dari kedelai: konstruksi pustaka cDNA

Abstract

Pustaka CDNA dari kedelai telah dikonstruksi dalam rangka mendapatkan klon-klon gen yang responsif terhadap cekaman kekeringan. Strategi pengklonan gen dalam penelitian ini melibatkan konstruksi pustaka CDNA. CDNA disintesis dari mRNA yang diisolasi dari tanaman yang mendapat perlakuan cekaman kekeringan. Isolasi mRNA dilakukan dengan metode standar dan sintesis CDNA dilakukan dengan paket sintesis CDNA Super Script (GIBCO BRL, USA). Pustaka CDNA dikonstruksi dengan menggunakan plasmid pSPORT1 dan plasmid yang mengandung cDNA ditransformasikan ke dalam sel Escherichia coli, dan ditumbuhkan pada medium LB padat yang mengandung antibiotik ampisilin (100 μg/ml). Pengujian pustaka cDNA dilakukan dengan analisis restriksi dengan enzim NotI dan SalI terhadap plasmid rekombinan dari 15 contoh koloni bakteri. Disamping itu telah dilakukan hibridisasi Southern dan hibridisasi koloni. Hasil isolasi mRNA menunjukkan bahwa mRNA yang dihasilkan cukup baik sebagai bahan sintesis CDNA. Optimasi- optimasi telah berhasil dilakukan sehingga isolasi mRNA dari tanaman kedelai dapat dilaksanakan secara rutin…dst