Analisis Ekspresi Gen Stresor pada Benih Ikan Lele Clarias gariepinus Pascacekaman Nitrit

Abstract

Tantangan yang dihadapi dalam budidaya intensif ikan lele adalah akumulasi amonia dan nitrit yang berasal dari amonifikasi sisa pakan dan ekskresi ikan. Amonia dan nitrit bersifat toksik dan dapat menyebabkan stres pada ikan. Salah satu respons fisiologis dari tubuh ikan terhadap paparan amonia dan nitrit adalah terjadinya transkripsi gen stresor yang mengodekan protein heat shock protein-70 (HSP-70) dan Cu-superoxide dismutase (Cu-SOD). Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis tingkat ekspresi gen HSP-70 dan Cu-SOD pada benih ikan lele Clarias gariepinus pascacekaman nitrit. Penelitian ini menggunakan lethal concentration 50 (LC50) nitrit yaitu 10 mg.L-1 untuk mematikan 50% populasi benih lele dalam kurun waktu 24 jam, menggunakan tiga akuarium yang masing-masing berisi 30 ekor benih ikan lele dengan volume 10 L yang dilengkapi dengan aerasi. Pada jam ke-0, 3, 6, dan 12 selama perlakuan, RNA total diekstraksi dari whole body ikan lele menggunakan pereaksi GENEzol (Geneaid, Taiwan). RNA total hasil isolasi dikuantifikasi menggunakan GeneQuant DNA calculator dan sintesis cDNA dilakukan menggunakan kit ReverTraAce® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover (Toyobo, Jepang). Ekspresi gen dianalisis menggunakan metode real-time PCR (qPCR) menggunakan mesin Rotor Gene (Corbett research, USA). Tingkat ekspresi gen HSP-70 dan Cu-SOD meningkat pada jam ke-3 dan ke-6 dibandingkan kondisi awal dengan pola yang berbeda. Nilai ekspresi gen tertinggi terjadi pada jam ke-3 pascacekaman nitrit 10 mg.L-1. Berdasarkan hasil yang diperoleh, gen Cu-SOD lebih berpeluang menjadi gen penanda untuk seleksi ikan lele tahan cekaman nitrit.