Optimasi Proses Kloning Genomik dan Identifikasi Gen Delta- Guaiene Sebagai Pembentuk Aroma Gaharu Pada Tanaman Aquilaria malaccensis Lamk

Abstract

Aroma wangi pada gaharu terbentuk oleh beberapa interaksi metabolisme sekunder, salah satunya guaiene [C15H24]. Tujuan penelitian ini adalah untuk optimasi proses kloning genomik dan identifikasi gen δ-guaiene sebagai pembentuk aroma gaharu pada tanaman A. malaccensis Lamk. Kloning dilakukan dengan metode shotgun sedangkan indentifikasi gen delta (δ)-guaiene dilakukan dengan teknik PCR menggunakan primer spesifik. Optimasi proses kloning dimulai dengan isolasi DNA genom, lalu dipotong dengan enzim restriksi EcoR1, purifikasi fragmen DNA berukuran besar, yang kemudian direkatkan pada vektor pGemTEasy, dan akhirnya ditransformasikan ke sel bakteri. Hasil transformasi berupa koloni biru-putih, namun hasil PCR koloni menunjukkan bahwa koloni putih yang ada tidak mengandung klon DNA insert, sehingga masih perlu modifikasi dan optimasi lebih lanjut. PCR dengan primer spesifik gen δ-guaiene berhasil mendapatkan fragmen dengan panjang basa 1449 bp. Nukleotida hasil sekuens yang diperoleh mirip dengan sekuens gen δ-guaiene dari A. crassna, namun agak berbeda dengan sekuens gen serupa dari A. malaccensis di pusat data NCBI.