Preparasi dan Optimasi Reaksi Real-time PCR Kalibrator Baru untuk Aplikasi Skoring Status HER-2.

Abstract

Amplifikasi HER-2 pada kanker payudara memberi implikasi pada terapi dan prognosis. Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) untuk amplifikasi HER-2 dan Immunohistochemistry (IHC) untuk pengukuran ekspresi protein merupakan dua metode yang telah diuji oleh FDA. PCR kuantitatif dilaporkan sebagai metode alternatif untuk penentuan amplifikasi HER-2. Pada penelitian ini dibandingkan dua housekeeping gene, 18S rRNA dan beta aktin, sebagai kandidat untuk kalibrator HER-2. Untuk pengembangan metode, optimasi dan studi perbandingan antara 18S rRNA dan beta-aktin, dilakukan menggunakan sampel non invasif (DNA sel bukal). Kandidat kalibrator terpilih selanjutnya diuji terhadap delapan belas sampel kanker payudara, divalidasi dengan metode qPCR mengacu pada Mendoza et al. 2013. Beta aktin sebagai kandidat terbaik sebagai kalibrator untuk skoring HER-2. Kesesuaian metode yang dikembangkan pada penelitian ini dengan metode yang dikembangkan oleh Mendoza et al. (2013) cukup tinggi yaitu 99.9%. Efisiensi qPCR untuk beta-aktin 103,8 dan HER-2 sebesar 105,3%, dengan nilai CV masing-masing sebesar 1.2%. Hasil yang didapatkan menunjukkan korelasi yang signifikan dengan metode yang dilaporkan oleh Mendoza et al. (2013), yang berpotensi sebagai komplemen dengan metode yang telah disetujui oleh FDA.