Konstruksi dan Ekspresi Gen Penyandi D-Xylose Isomerase di Escherichia coli BL21(DE3).

Abstract

D-fruktosa merupakan gula pentosa yang berpotensi sebagai pionir rare sugar karena dapat diubah menjadi beberapa rare sugar lain yang multifungsi sebagai pemanis, bahan kosmetik, pengawet, penstabil, zat aditif, antidiabetes, dan antiobesitas. D-fruktosa dapat diisomerisasi secara enzimatis dengan menggunakan D-Xylose Isomerase (D-XI). D-XI disandi oleh gen xylA. Tujuan dari penelitian ini adalah mengkonstruksi vektor ekspresi untuk gen penyandi DXI, dan mengekspresikan D-XI di dalam Escherichia coli BL21 (DE3). Untuk itu, gen xylA penyandi D-XI dari Lactobacillus pentosus BTCC 646 telah berhasil diklon di dalam vektor pGEM-T Easy di dalam Escherichia coli DH5α. Nukleotida ke 225 dari gen xylA telah berhasil diubah dengan mutagenesis situs terarah agar tidak dikenali oleh enzim BamHI tanpa mengubah asam amino yang disandinya sehingga gen xylA225 dapat disisipkan ke dalam vektor ekspresi pET-32b pada situs BamHI. Vektor ekspresi pET-32b-xylA225 telah berhasil dimasukkan ke dalam E. coli BL21 (DE3). Gen xylA225 di dalam pET32b-xylA225 telah berhasil diekspresikan membentuk protein D-XI yang berfusi dengan Trx tag sehingga berukuran sekitar 69.3 kDa di dalam E.coli BL21 (DE3).