Pengaruh Mutagenesis Situs Terarah dari Gen dpe penyandi dpsikosa 3-epimerase dari Agrobacterium tumefaciens Asal Indonesia terhadap Aktivitas Enzim.

Abstract

D-psikosa 3-epimerase (DPE) adalah salah satu enzim epimerase yang berfungsi mengkonversi D-fruktosa menjadi D-psikosa. Berdasarkan struktur tiga dimensi enzim DPE, residu yang terlibat dalam pengikatan substrat adalah I66, W112, E156, H186, dan R215, dan pengikatan logam adalah E150, D183, H209, E244, dan E150. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh mutagenesis situs terarah dari gen dpe penyandi d-psokosa 3-epimerase dari Agrobacterium tumefaciens terhadap aktivitas enzim DPE. Mutasi telah dilakukan pada situs asam amino ke 242 dengan mengganti kodon penyandi asam amino valin menjadi isoleusin menggunakan teknik PCR sehingga menjadi Atdpe V242I. Atdpe V242I hasil mutasi telah berhasil diklon di dalam E. coli DH5α Analisis SDS-PAGE menunjukkan bahwa Atdpe V242I telah berhasil diekspresikan di E. coli BL21 (DE3) menghasilkan enzim Atdpease V242I. Uji aktivitas enzim menunjukkan bahwa aktivitas enzim DPE V242I mengalami penurunan sebesar 27%. Penambahan ion logam Co2+ dapat meningkatkan aktivitas enzim AtDPE V242I sebesar 36,7% dan sehingga setara dengan AtDPE.