Isolasi Pregnancy Associated Glycoprotein dari Plasenta Sapi Peranakan Ongole

Abstract

Pregnancy associated glycoprotein (PAG) merupakan protein penanda kebuntingan anggota superfamili aspartat proteinase (AP) yang diekspresikan oleh sel-sel binukleat pada lapisan trophoblast plasenta mamalia terutama pada hewan ruminansia. Protein tersebut digunakan sebagai indikator kebuntingan ternak sapi mulai hari ke-26 pasca perkawinan. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh karakter dan isolat PAG dari plasenta sapi potong peranakan ongole (PO) sebagai substansi spesifik penanda kebuntingan. Jaringan plasenta sapi PO diperoleh dari rumah potong hewan lokal kemudian dilakukan proses pembersihan menggunakan NaCl 0.9% dan pengambilan placentom, selanjutnya disimpan pada suhu -85⁰C. Jaringan placentom dilakukan proses pembuatan sediaan histologi untuk identifikasi sel-sel penghasil PAG dan ekstraksi dengan perlakuan sentrifugasi serta presipitasi asam untuk memperoleh ekstrak placentom. Selanjutnya ekstrak dilakukan pemisahan protein menggunakan metode kolom terbuka Sephadex gel G-75 dan fraksi yang diperoleh dikarakterisasi dengan elektroforesis protein SDS PAGE. Fraksi kolom kemudian dianalisis menggunakan HPLC dan puncak protein yang terbentuk diisolasi serta diukur konsentrasinya menggunakan metode Lowry. Isolat protein yang diperoleh selanjutnya dilakukan konfirmasi menggunakan anti-bPAG-1 dengan metode ELISA. Hasil elektroforesis protein monogel SDS PAGE diperoleh pita protein dengan berat molekul 63.17-65.78 kDa yang tidak berbeda jauh dengan profil bPAG-1 pada berat molekul 48.69-70.03 kDa. Hasil kromatogram HPLC diperoleh 5 puncak protein dengan satu diantaranya (P2) mempunyai profil yang identik dengan bPAG-1 yaitu pada waktu retensi 6.464 menit. Hasil isolasi dari masing-masing puncak dan pengukuran total protein diperoleh protein dengan konsentrasi tertinggi yaitu pada puncak ke-2 (P2) 19.75±4.60 μg/ml serta puncak ke-3 (P3) 27.5±0.00 μg/ml. Induksi reaksi silang terhadap anti-bPAG-1 menunjukkan hasil positif untuk P2 dan P3, hal tersebut mengindikasikan bahwa isolat protein dari placentom sapi PO tersebut merupakan variasi dari PAG-1 karena memiliki kedekatan karakteristik dengan bPAG-1 sehingga berpotensi untuk digunakan sebagai substansi spesifik penanda kebuntingan untuk sapi PO.