Streptomyces Spp Penghasil Microbial Transglutaminase Dan Pengklonan Dna Penyandinya Melalui Konstruksi Pustaka Genom

Abstract

Enzim transglutaminase (TGase, E.C. 2.3.2.13) merupakan enzim yang mengkatalisis reaksi perpindahan gugus asil antara residu glutamin (Gln) yang berfungsi sebagai donor asil dan residu lisin (Lys) sebagai aseptor yang membentuk ikatan silang (crosslinking) ε-(γ-glutamyl) lisin isopeptida yang menghasilkan ikatan kovalen inter atau intramolekuler yang berikatan silang dengan protein makanan. Produksi enzim Microbial Transglutaminase (MTGase) dari strain liar mempunyai beberapa kelemahan yaitu selain pertumbuhan selnya lambat, produk yang dihasilkan sedikit dan protein yang dihasilkan juga bercampur dengan protein lainnya. Selain itu proses pemurnian cukup sulit karena memerlukan beberapa tahap pemurnian. Pendekatan teknologi rekayasa genetika sangat diperlukan untuk mendapatkan hasil yang lebih baik sehingga dapat dikembangkan dalam skala industri. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan bakteri yang menghasilkan MTGase dan mengklon fragmen DNA penyandinya. Untuk itu, penelitian ini dilakukan melalui beberapa tahapan yaitu, penapisan bakteri Streptomyces spp penghasil MTGase, identifikasi isolat penghasil MTGase dan pembuatan pustaka genom dengan mengkloning fragmen DNA 40 kb yang mengandung gen penyandi MTGase. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penapisan terhadap bakteri Streptomyces spp penghasil MTGase yang diisolasi dari berbagai jenis tanah di Indonesia, mendapatkan satu isolat yang potensial yaitu TTA 02 SDS 14. Analisis molekuler dengan PCR membuktikan bahwa isolat tersebut mengandung gen MTGase. Sekuen parsial gen MTGase dari isolat tersebut memiliki homologi 93 % dengan MTGase dari Streptomyces cinnamoneus. Berdasarkan sekuen gen 16S rRNA, isolat TTA 02 SDS 14 memiliki kekerabatan terdekat dengan Streptomyces thioleteus dengan homologi 99%. Pustaka genom dengan sisipan fragmen ~40 Kb yang membawa gen MTGase telah berhasil dikonstruksi dengan menggunakan fosmid pCC1FOSTM di dalam E.coli EPI300-TIR.