Evaluasi Penggunaan CpG DNA dalam Meningkatkan Ekspresi Gen Imun pada Ikan Kerapu Macan (Epinephelus fuscoguttatus)

Abstract

Unmethylated Cystidine Phosphate Guanosine Oligodeoxynucleotides (CpG DNA) merupakan salah satu jenis imunostimulan berupa DNA sintetik yang mengandung CpG motif yang terdiri dari sekuens pendek yang mengandung satu atau lebih motif CpG dan berperan sebagai ”danger signal” terhadap sistem kekebalan imun natural maupun bawaan. Tujuan penelitian ini adalah menganalisis kemampuan CpG DNA untuk meningkatkan ekspresi gen Interleukin 1β (IL1β), Cyclooxygenase 2 (COX-2) dan Tumour Necrosis Factor (TNF-α1) pada ikan kerapu macan agar dapat dijadikan sebagai imunostimulan maupun adjuvan vaksin. Analisis tingkat ekspresi gen dilakukan dengan mengekstrak RNA organ Head Kidney (kepala ginjal) dengan perlakuan CpG DNA dan perlakuan PBS sebagai kontrol. Sintesis DNA komplementer (cDNA) dilakukan menggunakan kit Ready To Go You Prime First Strand Beads (GE Healthcare) dengan teknik RT-PCR. Produk PCR yang dihasilkan kemudian di analisis dengan mengukur nilai luminescence photostimulated menggunakan software UN SCAN IT berdasarkan pola (ketebalan fragmen DNA). Hasil yang diperoleh dalam penelitian ini adalah tingkat ekspresi gen serta nilai luminescence photostimulated dari gen IL1β dan gen COX-2 pada perlakuan CpG DNA lebih tinggi dibanding pada perlakuan PBS sebagai kontrol sedangkan tingkat ekspresi gen TNF-α1 pada perlakuan CpG DNA dan perlakuan PBS sebagai kontrol hampir sama walaupun perbedaannya tidak begitu signifikan. Nilai luminescence photostimulated gen IL1β perlakuan CpG DNA yaitu 113684 dan pada perlakuan PBS sebagai kontrol 95610, gen COX-2 perlakuan CpG DNA yaitu 107592 dan pada perlakuan PBS sebagai kontrol 89207 serta gen TNF-α1 perlakuan CpG DNA yaitu 54818 dan pada perlakuan PBS sebagai kontrol 52062.