Kloning dan Identifikasi Gen-Gen Penyandi Enzim Xilanase Tahan Panas dari Streptomyces sp 451-3 Asal Kalimantan

Abstract

Perkembangan dan kemajuan dibidang pertanian dan industri pertanian menyebabkan peningkatan limbah yang sebagian besar merupakan limbah berlignoselulosa. Biokon-versi limbah pertanian ini dapat digunakan sebagai pakan ternak dengan diberi perlakuan enzimatik sehingga dapat meningkatkan daya cernanya. Penelitian bertujuan mendapat-kan klon yang membawa gen penyandi enzim xilanase Streptomyces sp, isolat 451-3 yang dapat digunakan pada industri dan dapat mendegradasi limbah-limbah pertanian sehingga memberikan nilai tambah. Tahun pertama telah dioptimasi media pertumbuhan Streptomyces untuk diisolasi genomnya . Untuk mendapatkan gen penyandi enzim xilanolitik Streptomyces sp 451-3 secara lengkap serta mampu diekspresikan, dipilih teknik shotgun cloning. Teknik shotgun cloning (sambrook et al 2001) dilakukan melalui pembuatan pustaka genom Streptomyces sp 451-3 menggunakan plasmid pBluescript KS+ (Stratagene, USA) dengan inang E. Coli DH5α. Fragmen DNA genom 4-10 kb diperoleh dengan cara memotong DNA genom Streptomyces sp 451-3 secara parsial menggunakan seri pengenceran unit aktivitas Sau3A1 0,2 U/l pada suhu 37C selama 30 menit. Dari hasil transformasi diperoleh 1.360 klon rekombinasi yang kemudian ditumbuhkan kembali pada media LB padat yang mengandung ampisilin (100 g/ml) dan X-Gal (40g/ml) yang ditambahkan 0,5% (w/v) brichwood xylan (Sigma Co, USA) dan diamati pembentukan zona beningnya). Dari 1.360 koloni transforman, ada 4 koloni yang dicurigai menghasilkan zona bening pada media xylan.