Pemisahan Protein Ekstrak Rennet Abomasum Domba Lokal dengan Metode Kromatografi Kolom Gel Filtrasi

Abstract

Protein fractination of rennet extracted from abomasal mucosa of local sheep was studied by gel filtration column chromatography method to fractinate chymosin and pepsin. Two abomasal samples of young adult local sheep aged 5-12 months were used in this study. Fundic mucosae of the abomasums were extracted into rennet and were frozen stored. Extracted rennet samples were processed to fractinate the enzymes by two steps of early fractination including salt precipitation with ammonium sulfate and dialysis using dialysis tube cut off 12 kD. Dialyzed samples were further processed using gel filtration column chromatography with sephadex G-75. Crude rennet extract, dialyzed rennet and collected fractions from chromatography were examined using milk-clotting test and SDS-PAGE to identify the existence of the enzymes. The collected fractions were also examined by spectrophotometer A280. The results showed that chymosin and pepsin were eluted in early fractions which total protein was high. The collected fractions from this study could be used to purify chymosin and pepsin using another purification method

Pemisahan protein rennet yang diekstraksi dari abomasum domba lokal dilakukan dengan metode kromatografi kolom gel filtrasi untuk memisahkan enzim pepsin dan khimosin. Pada penelitian ini digunakan dua sampel abomasum domba lokal usia dewasa muda (5-12 bulan). Mukosa fundus dari kedua sampel abomasum diekstraksi menjadi rennet dan disimpan beku. Rennet ekstrak kasar kemudian diproses lebih lanjut untuk memisahkan kedua enzim melalui dua tahapan fraksinasi awal, yaitu presipitasi garam dengan amonium sulfat dan dialisa menggunakan kantong dialisa cut off 12 kD. Hasil dialisa rennet kemudian difraksinasi lebih lanjut menggunakan kromatografi kolom gel filtrasi dengan matriks berupa sephadex-G75. Rennet ekstrak kasar, hasil dialisa rennet, dan fraksi-fraksi hasil kromatografi dianalisa menggunakan uji aktivitas koagulasi susu dan SDS-PAGE untuk mengetahui keberadaan enzim pepsin dan khimosin. Fraksi-fraksi hasil kromatografi juga dianalisa menggunakan spektrofotometer 280 nm. Hasil dari penelitian ini menunjukkan bahwa pepsin dan khimosin terelusi pada fraksi-fraksi dimana total proteinnya tinggi. Fraksi-fraksi yang diperoleh dari penelitian ini dapat digunakan untuk purifikasi lebih lanjut enzim pepsin dan khimosin menggunakan metode purifikasi lain.